ELISA实验常见问题（四）之实验结果OD值偏高

Rose

在往期推文《ELISA实验常见问题（二）之实验结果OD值偏低》（点击查看推文）中，帮大家汇总了ELISA实验结果OD值偏低的问题分析和解决方案，相信大家一定收获满满。
除了上述问题，大家对ELISA实验结果OD值偏高的问题是否存在困惑呢？不要慌！咱们这就将ELISA实验结果OD值偏高的原因和对策一一道来，助力大家顺利完成实验数据分析。
整体OD值偏高

可能原因	相应对策
a. 试剂盒组分被污染	使用新的试剂盒，按照说明书要求保存试剂盒
b. 试剂配制不正确	按照试剂盒说明书步骤，配制相应的试剂溶液
c. 吸液或加液不正确	检测移液器和吸头，使用校准好的移液器和正确的移液方法
d. 混用其他试剂盒试剂	保证使用试剂盒内完整的一套试剂进行实验，不同品牌及不同批次间的试剂可能存在不匹配现象
e. 洗涤次数不够	按照说明书的洗涤次数进行操作
f. 孵育温度不正确	按照说明书提供的孵育温度进行孵育
g. 孵育时未覆膜，导致溶液挥发污染	加封口膜，或者加盖进行孵育
h. 显色时间过长	根据实际显色情况酌情缩短或延长，一般为15分钟左右，但不可超过30分钟
i. 酶标仪设置错误	在酶标仪上检查波长和滤光片设置

标曲OD值正常，样本OD值过高

可能原因	相应对策
a. 样本浓度过高	稀释样本，查找文献/咨询技术支持后，通过预实验确定样本的最佳稀释倍数
b. 样本处理或保存不当（含干扰显色的内源性成分）	确保正确采集与保存样本，避免反复冻融
c. 基质效应	稀释样本可以降低基质效应

标准品/样本复孔差异大

可能原因	相应对策
a. 加样量孔间不一致	检测加样情况，使用校准好的移液器和正确的移液方法
b. 加样时，加在孔壁上部非包被区	加样枪头不要贴壁和触底
c. 混用其他试剂盒试剂	保证使用试剂盒内完整的一套试剂进行实验，不同品牌及不同批次间的试剂可能存在不匹配现象
d. 样品或试剂混合不充分	保证样品和试剂充分混匀
e. 洗板不彻底	按照说明书规定，进行洗板操作
f. 加入底物溶液和终止液体的顺序不一致	确保所有加液步骤顺序的一致性
g. 酶标板孔溶液存在气泡	加液时应规范操作，避免产生气泡，确保读取酶标板前不存在气泡
h. 试剂盒组分未平衡	确保酶标板和每个组分均平衡至室温后，再进行实验
i. 样本保存不当	确保正确采集与保存样本，避免反复冻融
j. 终止不充分	终止后的溶液，需要在完成振板操作后，再进行读数

空白背景值高

可能原因	相应对策
a. 试剂盒组分失活	使用新的试剂盒，按照说明书要求保存试剂盒
b. 试剂盒组分未平衡	试剂盒每个组分都需要平衡至室温后进行实验
c. 混用其他试剂盒试剂	保证使用试剂盒内完整的一套试剂进行实验，不同品牌及不同批次间的试剂可能存在不匹配现象
d. 洗液被污染	配制新的洗液
e. 检测抗体/酶结合物工作液浓度过高	使用说明书中推荐的稀释倍数
f. 酶标板洗涤不充分	保证每步洗涤完全，洗板时使用试剂盒配备的洗涤液，防止交叉污染
g. 酶标板拍板不完全	充分拍板至孔内无明显残留液体
h. 孵育温度过高	检查恒温箱，确保孵育温度稳定在37℃
i. 孵育时间过长	按照说明书的反应时间进行孵育

以上，是分享给大家的常见ELISA实验结果OD值偏高的原因及对策。更多问题，欢迎大家在评论区留言补充，后续将持续汇总整理，敬请期待~
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