wb实验 pcr实验和细胞培养哪个方向有发展前景？

营养师

从事那一方面呢？求助各位大神

原文地址：https://www.zhihu.com/question/507332878

继续前进

最近很多宝宝问类器官如何跟PBMC共培养，这个实验的关键点还是要先养好类器官，可以参照之前的类器官原代培养篇 “ 类器官原代培养全流程 ”。



图1 基质胶法构建类器官

那类器官培养成功的标准是什么呢？首先是我们培养的类器官需要稳定传代3代以上，才能表示其干性是比较好的，其次就是要经过组化鉴定，观察其和原组织形态和细胞类型上是否保持一致。经过鉴定后就可以进入我们下一步的实验了，类器官组化的方法跟我们常规组织操作方法是十分类似的，区别就在于类器官的固定上，操作方法小爱也给大家整理好了。详见“类器官实操大本营之——固定包埋”



图2 类器官组化鉴定

现在就进入我们共培养环节啦！
1、类器官准备
1）提前一周，复苏培养类器官至状态良好；
2）取合适数量类器官，使用预冷PBS清洗数次，去除大部分基质胶；
3）使用培养基重悬类器官。

2、PBMC分离和类器官共培养
1）外周血在无菌环境下，使用添加EDTA-K2的真空采血管采集，运输保存；
2）酒精消毒采血管表面，在生物安全柜内打开，将外周血转入无菌15mL离心管；
3）使用Ficoll法分离PBMC；
4）PBMC计数，计算活力与与细胞数；
5）使用培养基（RPMI1640，10%FBS，1%双抗，2mM谷氨酰胺，5ng/mL  IL-4与GM-CSF），悬浮调整至合适浓度，96孔板，每孔约加入5*105 活PBMC，100uL体积；
6）重悬类器官混合液，分别加入等量的样至96孔板中，至总体积200uL。

3、培养观察
1）D0观察记录细胞状态；
2）37℃，5%CO2条件下培养，每日连续观察；
3）D3吸出100uL培养上清，加入100uL新培养基，同时加入（处理抗体或药物）使至终浓度100nM（如果D3已出现显著差别，则记录大视野明场形态，终止实验）；
4）观察至实验组间差异显著，拍照记录大视野细胞明场形态；
5）细胞上清保存用于后续检测。



图3

此图为我司做得免疫共培养实验，从上图可明显看出B药物作用下，T细胞有明显的杀伤效果。

小爱推荐类器官与PBMC共培养套餐

类器官试剂盒（点击了解产品详情）


类器官与PBMC共培养产品推荐（点击了解产品详情）


文章推荐：“免疫共培养之——类器官 ”
需要原代培养操作视频可加微信号获取：13917886034

队长是我

如果立志做科研，这些都是基本实验技能，都需要掌握。但是既然问出了这个问题，应该是准备工作或者想要去工作的。那样的话我建议优先选择锻炼自己细胞培养能力，找工作路更宽一些，细胞培养不单单是养细胞，复苏，传代，冻存，无菌操作只是最基本的。看看有没有几个学习一下原代细胞培养，干细胞培养，或者细胞相关实验，比如细胞增殖/凋亡相关的实验，细胞系的建立，自学一下细胞三级种子库的建立方法；了解培养基的成分，了解一下细胞的驯化，网上看看医药界的细胞发酵是个什么东东；瞅瞅现在火的都快火不动的CAR-T是个什么东东。都了解了，嗯，恭喜你入门了。找工作的路千千万，选一个工资不低，门槛不高的却比较难。自己了解的多一分，面试的时候成功率就高一分。加油~~

大力水手

如果只是针对这三个实验，都没什么远大前景。这三个实验仅仅只是细胞或分子生物学的三个研究手段，不是方向。
细胞或分子生物学，往往这三个实验都有用到。如果仅仅只是盯着其中的一个，太过狭小，未来也就是在实验室或一些生物医药公司专门给人提供某种技术服务的technician

清风寡欲

如果你是本科生去公司的话，这三个方向都没啥不可替代的，只是最基本的分子生物学技能。要说区别，培养细胞比较麻烦，担心的事情比较多，细胞传到周末要加班。PCR做基因水平，WB做蛋白水平，这类检测分析技术一般有大量重复劳动。WB略有一些毒性试剂，而PCR相对好一点，差别都不大。而且公司应该会有轮换岗位的时候吧，最好能把这些基础技能都做好，慢慢提升自己。

卡卡

这三个都是生物专业的基础实验啊 谈不上哪个有发展 将来做研究这都是需要掌握的技术 是马上要进实验室做毕业实验？还是在考虑就职？