一文了解气阴两虚证动物模型的构建

生物科研实验室

在传统医学与现代健康观念深度交融的当下，国人对中医理论的认知不断深化。其中，气阴两虚证作为心血管疾病里常见的中医证型，愈发受到关注。它不仅是引发心血管疾病、促使病理产物生成的关键病因，还是导至心血管疾病病程冗长、难以治愈，甚至诱发其他病症的重要病机。
那么，气阴两虚证特色的心血管疾病动物模型的构建方法有哪些？每种构建方法的优缺点有哪些？
动物的选择      
大鼠、小鼠、小型猪。
造模方法
一般分为单因素构建心气阴两虚证动物模型、复合因素诱导的心气阴两虚证模型。01单因素模型
单因素心气阴两虚证模型包括睡眠剥夺、慢性间歇性失氧法、动脉阻塞法、高盐饲料喂养法构建心气阴两虚动物模型。1、睡眠剥夺法
改良多平台水环境法（modified multi-platform method, MMPM）是目前对啮齿类动物进行睡眠剥夺的常用方法，具体方法是：将动物放入自制水环境小平台装置（直径6.5 cm，高8.0 cm）中，注水，将动物站立于小平台，进入睡眠后动物会因全身肌张力下降垂头而触水惊醒，平台狭小难以移动，长期站立劳而不眠，时间连续96h。
模型验证：大鼠的抓握力下降，体温、旷场实验、舌脉、环腺苷酸水平等证候指标出现明显异常，表明构建冠心病急性心肌梗死气阴两虚大鼠模型成功。
优缺点：造模方法比较简单。但可能存在所造动物心功能损伤及症状不够典型的问题。此外，长期的睡眠剥夺与空间限制，可能会引起造模动物较大的应激反应，掩盖动物因睡眠剥夺导至的生理变化，影响模型构建。2、动脉阻塞法
小型猪麻醉后分离右颈总动脉，结扎远心端，注入肝素200U/kg后通过造影观察动脉分布情况，采用介入技术球囊封堵冠状动脉左前降支30min后撤出球囊进行再灌注损伤，小型猪出现精神萎靡，食欲下降，活动下降，皮肤杂乱，无光泽，反应差，挣扎力弱，叫声低沉，口腔黏膜苍白，舌面略干白、偏暗，舌、脉象评分增加，心脏缺血区和梗死区的面积明显增加，每搏输出量（stroke volume, SV）、每分输出量（cardiac output, CO）降低，外周血管阻力、左心做功上升的表现。3、高盐饲料喂养法
用8%的氯化钠（NaCl）对Dahl盐敏感性大鼠进行喂养构造气阴两虚证大鼠模型，不限制饮水，每只每日提供20g饲料。每两周进行一次鼠尾血压检测，经过20周的喂养后，进行进行心脏超声检查及血清氨基未端脑钠肽前体（N-terminal-pro brain natriuretic peptide, NT-proBNP）含量测量，评价模型是否建立成功。02多因素模型复合因素心气阴两虚证模型，是采用两种或两种以上的途径结合的方式诱导病症结合的动物模型，更能体现出中医证候病因病机的复杂特点同时又符合现代医学的临床病理，是目前更为推荐的动物模型构建方式。1、睡眠剥夺联合药物构建法
以恒定剂量（5 mg/kg）和递减剂量（第1日20 mg/kg，第2日10 mg/kg，第3~14日5 mg/kg）的异丙肾上腺素对小鼠进行皮下注射，连续30 d，在第31天时，将小鼠置于自制小平台中注水连续睡眠剥夺48h，发现大鼠精神萎靡，反应迟钝，皮毛粗糙，爪尾颜色暗淡，口鼻暗红，耳部血管充盈，舌面RGB值下降，周边活动时间减少，心、肺重/胫骨长度增加，左室内径增大，左心室射血分数（left ventricular ejection fraction, LVEF）、左心室收缩功能指数（left ventricular fractional shortening, LVFS）降低，心力衰竭气阴两虚证小鼠模型构建成功。
2、慢性间歇性缺氧联合药物构建法
采用慢性间歇性缺氧复合异丙肾上腺素的方法建立模型，小鼠从每晚9点开始持续禁食12h，第2天9点前将其放入低压氧仪中持续缺氧20min（氧分压为 7%~8%），每日1次，连续14d，第15天时尾静脉注射异丙肾上腺素5mg/kg，结果显示，小鼠T波抬高，LVEF、血清中肌酸激酶同工酶（creatine kinase isoenzyme, CK-MB）以及hs-CPR 明显升高，小鼠出现形体消瘦，食欲不振，疲倦乏力，烦躁等气阴两虚证的表现。3、力竭游泳联合药物构建法
联合舌下静脉注射垂体后叶素构建大鼠心肌缺血气阴两虚证模型，每天上、下午各使大鼠强制游泳2h，在末次灌服蒸馏水1h后舌下静脉注射垂体后叶素1U/kg，观察大鼠一般状态、心电图、血清学指标，结果显示，大鼠出现形体消瘦，食欲不振，疲倦乏力，烦躁，毛色暗淡，精神不振，体重下降，食欲降低，活动减少，学习、记忆能力降低的表现。心电图出现缺血性改变，血清肌酸激酶（creatine kinase, CK）、乳酸脱氢酶活性明显上升，SOD活性明显下降，血清中MDA含量显著增高。
模型构建中多采用复合因素诱导。单因素诱导法和复合多因素诱导法虽然各有优缺点，但复合多因素可以保证形成的模型更加符合中医理论中气阴两虚证的复杂特点，诱导的动物模型症状更加典型，更能诠释出心气阴两虚证的中医内涵。