Flowjo处理流式数据—细胞周期分析

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细胞周期检测在生物学和医学研究中具有广泛的应用价值。它可以用于检测癌细胞的细胞周期异常，还可以用于研究细胞增殖和凋亡的平衡,以及探索与细胞周期相关的疾病机制。流式细胞术可用于细胞周期分析，检测特定细胞群中处于细胞周期不同阶段的百分比。

1.打开Flowjo软件，将需要分析的文件拖入软件中；



2.双击文件，会跳出一个窗口；



3.在跳出的窗口中将FSC和SSC的坐标均改为线性。



4.点击不规则圈门-圈中目的细胞-命名细胞，点击OK



5.双击画好的门，会跳出一个新的仅展示圈中目的细胞窗口，点击FSC将坐标轴改为Pacific-Blue-A=DAPI，点击SSC，将坐标轴改为Pacific-Blue-H=DAPI。注：若染料用的是PI，则相应通道选择为PE-A和PE-H。



6.点击不规则圈门，画一个斜向上约45度角的门，去除黏连体，命名为Single Cells，即单细胞，点击OK；



7.回到软件页面，选中Single Cells，点击Cell Cycle。



8.跳出结果页面。周期分析完成。RMSD值用于衡量细胞周期分析中细胞分布图形的偏差程度，一般RMSD值越小，表示数据分析的准确性越高‌。后面为各个周期的占比及G1和G2期的平均荧光强度和CV值。



9.如果觉得拟合曲线不是很完美，可以手动修改相关参数，点开Model和Constraints，Watson（Pragmatic）和Dean-Jett-Fox两种拟合模型，选择适合的就可以。





10.或者修改G1峰的平均荧光强度值等于G2峰的平均荧光强度值的几倍，点击G1 Peak中的Peak--G2 x n，一般为0.5倍；还可以修改G1的CV值等于G2的CV值，点击G1 Peak中的CV--=G2CV,设置完成后Enter，软件均会重新拟合出一个结果。



11.还可以手动调整G1和G2峰的范围，分别点击G1和G2 Peak中的Peak—Range，设置两个峰的范围，设置完成后enter就会给出一个新的结果。





以上就是使用Flowjo软件分析细胞周期的常用步骤，大家有需要的可以学习起来。

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