HEK 293T细胞使用经验（转染、包病毒等）

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HEK 293T细胞是我们许多科研小伙伴的入门细胞，也常被称作“工具细胞”，实验中常使用它来进行，慢病毒包装生产及滴度测定，细胞转染，条件培养基制作，蛋白表达验证等试验。
在此，我将从以上几点展开来分享此工具细胞的用法。
背景知识和培养条件

HEK 293T细胞为人胚肾细胞；我个人使用DMEM高糖培养基（gibco）+10%胎牛血清（gibc，澳洲）+1%P/S培养；培养箱条件：5%CO2，37℃。
细胞转染

• 细胞转染的目的
  

粗略理解为使用阳离子聚合物+质粒构成的复合物转入细胞内，让你转入的质粒瞬时表达，产生一个短暂（约持续96h）的效应，用于短期实验。
2. 转染的原理
阳离子聚合物能够和带负电的质粒形成复合物，复合物穿膜（或是膜融合或是内吞）被细胞“吃掉”，从而将你的目的质粒带入细胞内。大约在转染完成后的48h，可以对细胞的转染效率和蛋白表达进行检测。
检测时，转染效率=检测阳性细胞数/检测时总细胞数*100%，一般使用流式细胞术进行检测。
3. 转染试剂
常用的转染试剂有Higene、Lipo系列、PEI，个人推荐PEI，因为转染效率和价格平衡的比价好。
4. 转染条件和过程
以PEI用作转染试剂的转染为例，配制浓度为1μg/μL的PEI（配制方法网上搜索一下很好查），准备你的待转质粒（假设浓度为也为1μg/μL=1000ng/μL）。
PEI转染时的原则为，质量比，PEI:质粒=3:1；转染时需要使用无血清无双抗的培养基将PEI和质粒分别做成稀释液（一般称为A液和B液），再混合在一起方便两者聚合。以10cmdish的转染为例，10cm dish一般转染10μg的质粒,那么我们需要30μg的PEI。
A液：10μL质粒→500μL 无抗无血清DMEM，混匀
B液：30μLPEI  →500μL 无抗无血清DMEM，混匀
B液逐滴加入A液中，涡旋1min，或枪头吹打约80次，室温孵育15-20min，不需要再次混匀直接填加到铺好的10cm dish中。
转染后18h，将培养液更换成新鲜的DMEM完全培养基；转染24-96h后检测。
慢病毒包装

慢病毒一般为HIV等为基础改造的接近无毒，感染后不进行复制的稳转株构建运载体。可以将目的基因携带并整合到细胞的基因组中，持续表达（普通转染一般指表达数天，随着分裂质粒会渐渐被稀释掉），进行长期试验。
慢病毒包装的过程和转染相似，主要区别在于慢病毒包装一般为多质粒混合转染（不同质粒含有病毒的不同元件），多个质粒的总质量和PEI的质量以及转染过程都与普通转染无异。
不同的是一般在转染后48h后，也就是换液后的30小时，收集细胞上清作为病毒的粗制品，来感染目的细胞。
这块有小伙伴需要的话我再添加详细的步骤。


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