一、实验常用溶液配方
1、1 M Tris-HCl组份浓度: 1 M Tris-HCl(pH 7.4,7.6,8.0)
配制量: 1 L
配置方法:称量 121.1 g Tris 置于 1 L 烧杯中。加入约 800 mL 的去离子水,充分搅拌溶解。按下表量加入浓盐酸调节所需要的 pH 值。pH 值浓 HCl 量7.4约 70 mL7.6约 60 mL8.0约 42 mL将溶液定容至 1 L。高温高压灭菌后,室温保存。注意: 应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值,因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大,温度每升高 1℃,溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。2、1.5 M Tris-HCl组份浓度: 1.5 M Tris-HCl(pH 8.8)
配制量: 1 L
配置方法:称取 181.7 g Tris 置于 1 L 烧杯中。加入约 800 mL 的去离子水,充分搅拌溶解。用浓盐酸调 pH 值至 8.8。将溶液定容至 1 L。高温高压灭菌后,室温保存。注意: 应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值,因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大,温度每升高 1℃,溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。3、10×TE Buffer组份浓度: 100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA(pH 7.4,7.6,8.0)
配制量: 1 L
配置方法:量取下列溶液,置于 1 L 烧杯中。1 M Tris-HCl Buffer(pH 7.4,7.6,8.0)100 mL500 mM EDTA(pH 8.0)20 mL向烧杯中加入约 800 mL 的去离子水,均匀混合。将溶液定容至 1 L 后,高温高压灭菌。
4、PBS Buffer组份浓度: 137 mM NaCl,2.7 mM KCl,10 mM Na₂HPO₄,2 mM KH₂PO₄
配制量: 1 L
配置方法:称量下列试剂,置于 1 L 烧杯中。NaCl 8 gKCl 0.2 gNa₂HPO₄ 1.42 gKH₂PO₄ 0.27 g向烧杯中加入约 800 mL 的去离子水,充分搅拌溶解。滴加 HCl 将 pH 值调节至 7.4,然后加入去离子水将溶液定容至 1 L。高温高压灭菌后,室温保存。注意: 上述 PBS Buffer 中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充 1 mM CaCl₂ 和 0.5 mM MgCl₂。
5、5 M NaCl组份浓度: 5 M NaCl
配制量: 1 L
配置方法:称取 292.2 g NaCl 置于 1 L 烧杯中,加入约 800 mL 的去离子水后搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至 1 L 后,适量分成小份。高温高压灭菌后,4℃ 保存。6、20% (W/V) Glucose组份浓度: 20% (W/V) Glucose
配制量: 100 mL
配置方法:称取 20 g Glucose 置于 100~200 mL 烧杯中,加入约 80 mL 的去离子水后,搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至 100 mL。高温高压灭菌后,4℃ 保存。7、10×Western Blot 电泳液配置方法:称取甘氨酸 144.0 g,Tris 30.3 g,SDS 10 g。加入去离子水定容至 1 L 保存。使用时取 100 mL 10×Western Blot 电泳液,加 900 mL 去离子水,配置成 1×Western Blot 电泳液。8、1×Western Blot 电泳液配置方法:称取甘氨酸 14.40 g,Tris 3.03 g,SDS 1 g。加入去离子水定容至 1 L。
6、20% (W/V) Glucose组份浓度: 20% (W/V) Glucose
配制量: 100 mL
配置方法:称取 20 g Glucose 置于 100~200 mL 烧杯中,加入约 80 mL 的去离子水后,搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至 100 mL。高温高压灭菌后,4℃ 保存。7、10×Western Blot 电泳液配置方法:称取甘氨酸 144.0 g,Tris 30.3 g,SDS 10 g。加入去离子水定容至 1 L 保存。使用时取 100 mL 10×Western Blot 电泳液,加 900 mL 去离子水,配置成 1×Western Blot 电泳液。8、1×Western Blot 电泳液配置方法:称取甘氨酸 14.40 g,Tris 3.03 g,SDS 1 g。加入去离子水定容至 1 L。9、10×Western Blot 转膜液配置方法:称取甘氨酸 144.0 g,Tris 30.3 g。加入去离子水定容至 1 L 保存。使用时取 100 mL 10×Western Blot 转膜液,加 700 mL 去离子水和 200 mL 甲醇,配置成 1×Western Blot 转膜液。10、1×Western Blot 转膜液配置方法:称取甘氨酸 14.40 g,Tris 3.03 g。加入去离子水 800 mL 和甲醇 200 mL。11、10% 过硫酸铵(AP)配置方法:0.1 g AP 加 ddH₂O 至 1.0 mL。4℃ 保存,最好在一周内使用,建议新鲜配制。12、TBS 缓冲液(10×TBS)配置方法:称取 Tris 121.1 g,NaCl 87.7 g。加入去离子水定容至 1 L 保存。用时取 100 mL 10×TBS 稀释 10 倍,添加 1 mL Tween 20,用 HCl 调整 pH 值到 7.5,获得 1×TBST。