流式细胞术是病理诊断的好帮手

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一、什么是流式细胞术？
流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是一项极具挑战性的检测技术，它使用流式细胞术作为主要分析设备，对悬浮在液体环境中的单个活细胞进行分析和测量。它通常被称为流式细胞术。
自20世纪70年代以来，基于荧光的流式细胞术已经发展了50多年，是一种非常成熟的细胞检测技术，在生物医学领域得到了广泛的应用。
在病理诊断中，它已成为继基因诊断技术之后的又一高新技术，在肿瘤病理研究中发挥着越来越重要的作用。

二、流式细胞术的原理是什么？
流式细胞仪由分析系统、电子系统、光学系统和液流系统四部分组成。它只能检测悬浮粒子或单个细胞的信号。
流式细胞术的工作原理是:首先用激光测量鞘液中染色的细胞标记物，然后记录荧光强度、荧光宽度、散射光强度等参数。此外，根据荧光标记的不同类型的单克隆抗体对被测物质进行细胞组成分析。



流式细胞术原理图

流式细胞术收集和分析散射光和荧光信号。荧光信号可以是细胞或粒子在激发光照射下产生的一种自荧光;也可以是在标本处理过程中，用特定物质标记的荧光物质发出的特定荧光信号。
荧光染色技术是指在激光照射下，使标本中的细胞或颗粒物质携带一定的荧光物质，并发出相应的特定荧光。所使用的荧光物质也被称为荧光染料、荧光颜料或荧光素。



流式细胞术原理图

三、流式细胞术的作用
（1）流式细胞术与DNA倍体分析
DNA非整倍体的出现可能是癌前病变早期癌变的重要指标。
细胞DNA含量和倍性的定量分析有助于恶性肿瘤的诊断。近年来，流式细胞术逐渐应用于临床，定量检测脱落细胞中的DNA。特别是对食管、胃、宫颈、结肠、鼻咽部、口腔黏膜、子宫内膜等部位癌前病变的研究结果表明，DNA指数和非整倍体的概率随着上皮增生的增加而增加。随访后发现近一半的非整倍体细胞发生癌变。
这意味着DNA非整倍体的发生率与癌变率和非典型增生程度密切相关。



图a：PI标记法检测细胞周期流式图图b: 肿瘤组织细胞DNA直方图

DNA倍性分析的相关临床应用如下:
①用于肿瘤的早期诊断和鉴别;
②用于疑似癌症的诊断;
③用于良恶性胸腔积液和腹水的鉴别诊断;
④用于监测临床肿瘤治疗效果;
⑤临床抗肿瘤治疗的药物选择;
⑥用于早期淋巴瘤的诊断;
⑦用于区分良性肿瘤与中、低度恶性肿瘤;
⑧用于肿瘤患者的预后评估。
（2）流式细胞术与白血病免疫分型诊断
以荧光素标记的单克隆抗体为分子探针，利用流式细胞术检测细胞上的特异性抗原分子，对细胞群进行分类和分化，称为流式细胞术免疫分型分析。
流式细胞术可以同时识别单个细胞上的多种抗原，可以在很短的时间内分析大量的细胞，对疾病特别是白血病的诊断、治疗和发病机制的研究具有重要意义。
流式细胞术免疫分型可提高恶性血液病诊断和分类的准确性，发现微小残留病变，判断预后。
其主要优点如下:
①区分淋巴细胞和骨髓细胞，区分T淋巴细胞和B淋巴细胞。
②确定白血病细胞群和白血病细胞所处的阶段。
③灵敏度高于基因和染色体分析，速度高于染色体和基因分析。


血液病患者在整个病程中需要多次流式细胞术检测。
在初次诊断时，需要流式细胞术辅助诊断和分型;在疾病过程中需要对治疗效果进行流量监测;在骨髓移植过程中，流式细胞术需要准确计数来自供体的CD34阳性细胞;化疗或骨髓移植完全缓解后，需要流式细胞术检测最小残留病变(MRD)。
（3）流式细胞术与淋巴瘤免疫分型诊断
淋巴瘤是临床上难以诊断的一类疾病，需要从形态学、免疫表型、遗传学、临床表现等方面进行综合分析。然而，任何单一方面的信息都不是诊断的黄金标准。流式细胞术在淋巴瘤残留病变的诊断、分类、分期和监测中具有独立而重要的作用。
流式细胞术在淋巴瘤的早期诊断中具有比形态学更灵敏、准确的优点。它可以检测到正常和异常细胞之间DNA含量的微小差异，并在形态学做出诊断之前提供准确的诊断信息。
淋巴瘤免疫分型诊断作为免疫组织化学的一种补充诊断方法，以其快速、客观、定量、多参数分析等独特优势，在淋巴瘤诊断中发挥着不可替代的作用。



弥漫大B细胞淋巴瘤患者流式免疫分型结果

综上所述，随着流式细胞术的发展以及多色流式细胞术和抗体技术的应用，它在肿瘤的病理诊断中发挥着越来越重要的作用，成为病理诊断的重要工具。
此外，流动免疫荧光染色技术作为一种与免疫组织化学相辅相成的诊断方法，以其快速、客观、定量、多参数分析等独特优势，已成为病理学中不可缺少的诊断方法之一。这将在未来对病人疾病的诊断做出越来越大的贡献。
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