细胞免疫荧光

balabala

• 将预处理好的细胞从培养箱中取出，弃掉培养液，PBS洗涤3次，5min/次；后用4%多聚甲醛固定30min。(细胞固定)
  
• 弃去多聚甲醛，PBS洗涤3次，5min/次；加入0.1%的穿透液(0.1%Triton-X 100+1%BSA+99%PBS配置)，室温穿透1h。（细胞穿透）
  
• 弃去穿透液，PBS洗涤3次，5min/次；加入封闭液（用1%BSA配置10%山羊血清作为封闭液，可配置两倍的量，后续封闭会用到），室温封闭1h。（封闭）
  
• 封闭结束后，参考抗体说明书用封闭液配置一抗，将玻片用镊子抠出置于孵育盒上，滴上配置好的一抗，每个玻片大概20ul，于4℃过夜。（一抗孵育）
  
•   次日，回收一抗，PBS洗涤玻片3次，5min/次，吸干玻片上的液体，滴加稀释后的Alexa fluor 594羊抗兔荧光二抗（如果一抗是R的，则二抗也应该是R的，种属须对应），用PBS按照1：500稀释，室温避光孵育1h。（二抗孵育）
  
• 孵育结束后，PBS洗涤玻片3次，5min/次，吸干玻片上多余的液体，滴加含DAPI的抗荧光猝灭剂的封片液进行封片，避光操作。（染核封片）
  
• 使用荧光显微镜进行拍片观察。
  

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