Western blot实验试剂和器材？

大v

我老师的实验室要做Western blot的实验了，老师叫我去采购全套试剂器材，我没买过，不知道去哪买这些试剂和器材，也不知道哪个牌子的比较好，所以来请教各位大神

原文地址：https://www.zhihu.com/question/61589982

同花顺

求分享！我也被安排了同样的任务，请问您有答案了嘛♥️♥️

卡卡

北京德航五洲科技有限公司

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1、PBS的配制：
900ml去离子水溶解以下成分
1）Nacl 8g
2）Kcl 0.2g
3）Na2HPO4.12H2O 3.5g
4）KH2PO4 0.2g
调PH值至7.4（也可不调）
定容至1000ml.
2、三去污裂解液的配制：
1）50mmol/L Tris碱（PH值8.0）（0.6057g/100毫升）
2）150mmol/L Nacl（0.8766g/100ml）
3）0.02%叠氮钠（0.02g/100ml）
4）0.1%SDS（十二烷基磺酸钠）（0.1g/100ml）
5）1.0ug/ml Aprotinin（可无）
6）1%Nonidet（NP-40）（1ml/100ml）
7）0.5%去氧胆酸钠（0.5g/100ml）
8）100ug/ml PMSF（苯甲基磺酸氟）（临时加入）
注意事项：用80ml去离子水溶解0.6057g Tris碱，调 PH值至8.0，再用该溶液溶解2—7项，定容至94ml，PMSF配成16.67mg/ml的贮存液及1.667mg/ml的工作液, 每94ul的裂解液加6ul PMSF工作液。
3、SDS加样缓冲液的配制：
1×SDS凝胶加样缓冲液的配制：
1）50mmol/L Tris碱（PH值6.8）（0.1212g/20ml）
2）2%SDS（电泳级）（十二烷基磺酸钠）（0.4g/20ml）
3）0.1%溴酚兰（0.02g/20ml）
4）10%甘油（2ml/20ml）
注意事项：用10ml去离子水溶解 0.1212g Tris碱（调PH值至6.8），再用该溶液溶解4、2、3，定容至20ml.
2×SDS凝胶加样缓冲液的配制，终浓度为：
1）100mmol/L Tris碱（PH值6.8）（0.2424g/20ml）
2) 4%SDS（电泳级）（十二烷基磺酸钠）（0.8g/20ml）
3）0.2%溴酚兰（0.04g/20ml）
4）20%甘油（4ml/20ml）
5）200mmol/L DTT（二硫苏糖醇）(临用时加入)
注意事项：用6ml去离子水溶解0.2424g Tris碱（调PH值至6.8），再用该溶液溶解4、2、3，定容至16ml；DTT配成1mol/L的贮存液[lml（略少） 0.01mol/L乙酸钠溶液（PH值5.2）（分子量136.08）溶解0.15424g DTT，最好过滤除菌]，临用时按上清液：2×SDS：DTT=1：0.8：0.2的比例加入。
4×SDS凝胶加样缓冲液的配制，终浓度为：
1）200mmol/L Tris碱（PH值6.8）（0.4848g/20ml）
2) 8%SDS（电泳级）（十二烷基磺酸钠）（1.6g/20ml）
3）0.4%溴酚兰（0.08g/20ml）
4）40%甘油（8ml/20ml）
5）400mmol/L DTT（二硫苏糖醇）(临用时加入)
注意事项：用2ml去离子水溶解0.4848g Tris碱（调PH值至6.8），再用该溶液溶解4、2、3，定容至16ml；DTT配成2mol/L的贮存液[lml（略少） 0.01mol/L乙酸钠溶液（PH值5.2）溶解0.30848g DTT，最好过滤除菌]，临用时按上清液：4×SDS：DTT=3：0.8：0.2的比例加入。
5×SDS凝胶加样缓冲液的配制，终浓度为：
1）250mmol/L Tris碱（PH值6.8）（配成0.606g/20ml）
2) 10% SDS（电泳级）（十二烷基磺酸钠）（2g/20ml）
3）0.5%溴酚兰（0.1g/20ml）
4）50%甘油（10ml/20ml）
5）500mmol/L DTT（二硫苏糖醇）(临用时加入)
注意事项：用2ml去离子水溶解0.606g Tris碱（调PH值至6.8），再用该溶液溶解4、2、3，定容至16ml；DTT配成2.5mol/L的贮存液[lml （略少）0.01mol/L乙酸钠溶液（PH值5.2）溶解0.3856g DTT，最好过滤除菌]，临用时按上清液：5×SDS：DTT=4：0.8：0.2的比例加入。
4、30%聚丙烯酰胺溶液的配置：
1）丙烯酰胺29g
2）亚甲双丙烯酰胺1g
3）去离子水定溶至100ml
5、1.5mol/L Tris-cl PH 8.8的配制：
1）Tris-cl base 18.165g（分子量为121.1）
2）去离子水定溶至90ml
3）调PH至8.8
4）去离子水定溶至100ml
6、1mol/L Tris-cl PH 6.8的配制：
1）Tris-cl base 12.11g（分子量为121.1）
2）去离子水定溶至90ml
3）调PH至6.8
4）去离子水定溶至100ml
7、AP（过硫酸铵）的配制：
0.1gAP+1ml去离子水
8、TEMED的配制：
无须特殊配制，直接吸取原液。
9、10%分离胶的配制（其余浓度见分子克隆）：

10%分离胶	去离子水	30%聚丙烯酰胺溶液	1.5mmol/L Tris-cl(PH值8.8)	10%SDS（十二烷基磺酸钠）	10%过硫酸铵（AP）	TEMED（四甲基乙二胺）
3.5ml	1.353	1.167	0.91	0.035	0.035	0.0014

10、5%积层胶的配制（其余浓度见分子克隆）：

5%积层胶	去离子水	30%聚丙烯酰胺溶液	1.0mmol/L Tris-cl(PH值6.8)	10%SDS（十二烷基磺酸钠）	10%过硫酸铵（AP）	TEMED（四甲基乙二胺）
1.2ml	0.816	0.204	0.156	0.12	0.12	0.0012

11、Tris-甘氨酸电泳缓冲液的配制：
5x贮存液：
1）1250mmol/L甘氨酸（电泳极）(94g/L)
2）125mmol/L Tris碱(15.1g/L)
3）0.5%SDS（十二烷基磺酸钠）（5g/L）
4）去离子水定溶至1000ml
工作液：200ml5x贮存液+800ml去离子水
1）250mmol/L甘氨酸（电泳极）
2）25mmol/L Tris碱
3）0.1%SDS（十二烷基磺酸钠）
12、转移缓冲液的配制：
2x半干法贮存液：
1）384mmol/L甘氨酸（28.8g/L）
2）48mmol/L Tris-base（5.8g/L）
3）去离子水定溶至800ml
半干法工作液：400ml贮存液+200ml甲醇溶液+去离子水
1）192mmol/L甘氨酸（14.4g/L）
2）24mmol/L Tris-base（2.9g/L）
3）20%甲醇溶液（200ml/L）
2X湿转法贮存液：
1）78mmol/L甘氨酸（5.8g/L）
2）96mmol/L Tris-base（11.6g/L）
3）0.074%SDS(电泳极)（十二烷基磺酸钠）（0.74g/L）
4）去离子水定溶至800ml
湿转法工作液：400ml贮存液+200ml甲醇溶液+去离子水
1）39mmol/L甘氨酸（2.9g/L）
2）48mmol/L Tris-base（5.8g/L）
3）0.037%SDS(电泳极)（十二烷基磺酸钠）（0.37g/L）
4）20%甲醇溶液（200ml/L）
13、考马斯亮兰染色液的配制：
50ml甲醇+40ml去离子水+10ml冰醋酸（冰乙酸）+2.5g考马斯亮兰R250或45ml甲醇+45ml去离子水+10ml冰醋酸（冰乙酸）+2.5g考马斯亮兰R250
14、考马斯亮兰脱色液的配制：
50ml甲醇+40ml去离子水+10ml冰醋酸（冰乙酸）或
45ml甲醇+45ml去离子水+10ml冰醋酸（冰乙酸）
15、丽春红染色液的配制：
5x贮存液：
1）丽春红S 0.1g
2）三氯乙酸1.5g
3）磺基水杨酸1.5g
4）去离子水定溶至10ml
工作液：
2ml丽春红染色5x贮存液加8ml去离子水。
16、TBST的配制：
1）Tris碱 4.84g
2）Nacl 16g
3）去离子水定溶至1900ml
4) PH值调至7.6(加浓盐酸3.0ml左右)
5）1‰Tween-20 2ml
6）去离子水定溶至2000ml
17、5%脱脂奶粉的配制：
1）2.5g脱脂奶粉
2）TBST定溶至50ml
18、荧光剂（武汉博士德）的配置：
1）吸180ul去离子水至EP管中
2）吸10ul A液至EP管中
3）吸10ul B液至EP管中
19、显影剂的配制：
1）250ml去离子水预热至50℃
2）显影粉（先加小包，搅拌溶解后再加大包，温度下降至18℃以下时即可使用）
20、定影剂的配制：
1）250ml去离子水预热至50℃
2）定影粉（搅拌溶解，温度下降至18℃以下时即可使用）
北京德航五洲科技有限公司（简称德航五洲）以德起航，诗书五洲，寓意中国传统文化的 “厚德传家久、诗书五洲远”，德之基石，航行五洲，致力于成为科学服务行业生命科学产品（尤其围绕“试剂产品”）的优秀供应商。自主产品涵盖了：高品质生物试剂、通用化学试剂、小分子抑制剂、标准品、预混溶液（生命科学）产品；同时注重与国际先进企业的合作与交流。JSENB品牌的创立者，香港吉斯恩贝国际贸易有限公司，是一家为生命科学、精细化学、分析诊断领域供应产品与技术服务的全球性公司。VIRTUE-CLARA：只要有生命科学的地方，就有VIRTUE-CLARA，注重“家”的概念，不断扩容，为实验室提供全品类的试剂材料零售。摩莱MLC：通用化学试剂品牌，“品质、低价、快乐”的购物体验。在供应链原料贸易行业，针对OEM厂商提供产品大货定制服务。德航五洲零售商城：2020年初，德航五洲集团以全新的电子商务视角建设了线上零售商城---品科研超市。品科研超市：品科研|科研试剂超市|河北品科研生物科技有限公司官网，科研服务行业的一体化、一站式、正品直营的试剂零售平台



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