养细胞有哪些经验和教训？

风云

每天孝敬细胞比孝敬爹妈还用心，不知道大家在培养细胞时有哪些经验教训可以分享。
原文地址：https://www.zhihu.com/question/21306808

长长的路

养了三年细胞，各种肿瘤细胞，大家的回答已经很全面了，稍微补充一点自己的看法：
1、我们实验室细胞基本上都是在ATCC（
ATCC: The Global Bioresource Center）买的，一个新细胞在养之前，可以看看ATCC上面说明的细胞特点，包括细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。
2、不同细胞生长周期不同，有的生长很快，比如说MDA-MB-231，传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了，有的又是特别慢，等的人心焦，BT474就是，传代是一分二，复苏起始的时候两周多才能长满，所以就要在培养细胞的过程中多多摸索了。
3、对于娇弱的细胞，就得细心呵护了，胰酶消化不能过久，吹得时候要轻柔，离心时候也要注意转速和时间，每天都要去看一下细胞，肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。
4、冻存细胞复苏后第二天最好更换一次培养基。
5、培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次。
6、养细胞最大的教训：不能偷懒！！

卡卡

现在一大型药企养细胞做检测，工作量很大，很多地方都没办法非常仔细的做。但是两年下来只出现过一次污染，总结一下心得：
1、好的洁净室，空调系统跟得上。
2、好的生物安全柜，硬件跟的上。
3、瓶子移液器吸头大都是进口，耗材跟的上。
除了这些就是自己的操作习惯了
4、任何东西不要从敞开的瓶口上面经过。
5、虽然酒精灯会干扰安全柜气流但是还是需要一盏用来勤烧瓶口。
6、实验时所用材料的位置摆放要顺手，污染源和已灭菌物品要分开放置。

同样的实验做了三年，马上要辞职了。匿了。

大力水手

养过一段时间的Hela和Siha，都是跟别人要的。分享一点经验吧。
1、别怕浪费。枪头什么的只要有可能污染就换，如果用酒精灯就什么都稍微烤一下，别直接放到火上，离一段距离。
2、动作要既轻柔又有力。动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来。。。刚开始的时候吹细胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来，留一点，枪的最头部尽量深的在液面以下。
3、离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。
4、实验结束后对实验台的消毒。紫外什么的，用前用后都照个30分钟。
5、身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。比如实验台，又比如培养箱内部。
6、细胞的密度根据细胞的性质、传代的时间以及自己的心情来定。培养基的话最多最多不要超过2天就要换一次。细胞可以不传代，但是培养基是一定要换的。
大概就是，不该碰的地方不碰，有影响的地方少碰；该使劲的时候绝对不含糊，不该使劲的地方一定忍住。如果是比较简陋的操作台就一定要摆个酒精灯，所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。如果是高级台子就多用酒精喷喷。感觉生物的实验，心疼钱就还是不要做了。。。
最后一点点绝对非科班的经验。癌细胞真是坚挺。有一次实在是不想传了，放了5天吧，感觉都长了几层出来来，培养基都黄了。抱着试一试的心情传了一次，又坚强的活过来了。。。当然，状态肯定也差的很了。

大力水手

个人经验：
1、不管买的细胞、惠赠的细胞，刚拿到手赶紧的做两件事：1、检测是否有支原体污染；2、迅速扩增冻存。
2、发现有污染迅速处理掉，特别是当你养了很多种细胞时；细菌污染，真菌污染很容易发现，支原体污染的话，细胞会长的慢，买个支原体检测的kit定期检测一下。
3、细胞房日常的值日清洁是必须的，此外还要定期熏蒸。
4、细胞的传代一定要规律，保持相同的confluency和传代时间间隔，不要随心所欲或者拖延...
5、个人卫生。

清风寡欲

严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。
不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。
有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。
水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换（灭菌水加进去）。
晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开吧。
最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。
初步就想到这么多，虽然我准备转硕闪人了，但一想起这些玩意，还是有回答问题的冲动。