流式细胞术检测细胞周期

莺歌燕舞

实验方法

1．用6孔板培养细胞，待细胞生长达到60%-70%，根据实验需求处理，继续培养；
2．根据实验细胞处理后，把细胞吸出至1.5ml离心管内，200g 离心5min；
3．用 PBS 洗涤细胞2次，200g离心5min，收集1-5×105 细胞；
4．细胞固定：加入1ml冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃固定2h或更长时间。固定12-24 h可能效果更佳。200g左右离心3-5min，沉淀细胞。加入约1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。 注意：70%乙醇在使用前需进行预冷处理
5．碘化丙啶染色液的配制：参考下表，根据待检测样品的数量配制适量的碘化丙啶染色液：



6．染色：每管细胞样品中加入0.5 ml碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30min。随后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24h内完成流式检测。
7．流式检测：用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，同时检测光散射情况。
结果示例及分析




图片解析：
①G1期(gap1)，指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间；
②G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间；
③S期(synthesis phase)，指DNA复制的时期。
图中第一个峰为G1期，第二个峰为S期，第三个峰为G2期

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