打高分辨质谱，浓度要求是多少？

检验之星

打高分辨质谱，浓度要求是多少？
原文地址：https://www.zhihu.com/question/586058993

长长的路

高分辨质谱样品要求
1
样品应使用质谱级甲醇、乙腈进行溶解。严禁使用DMF、四氢呋喃、DMSO、石油醚、二氯甲烷等溶剂溶解样品，此类试剂会使得质谱图上形成高聚物系列峰，影响样品测试，同时也会对仪器内部管路造成严重损坏。
2

样品上样前必须过0.22um微孔滤膜，保证样品为无悬浮颗粒、澄清透明的液体。
3

严禁样品含有无机或有机强酸、强碱、表面活性剂、磷酸盐等不挥发盐。
4

严禁测试具有腐蚀性、剧毒性、放射性样品。
5

高分辨质谱样品浓度应小于1ppm，避免样品浓度太高，污染仪器，同时对测试的结果造成影响。
6

做完核磁的氘代溶液严禁直接进行高分辨质谱测试，必须先将氘代溶液氮吹后，再使用高分辨质谱级甲醇/乙腈复溶后才可上机。


02
送样要求

• 必须提供被测化合物的分子式、结构式，且液体样品必须告知所用溶剂。
  
• 提供样品离子化方式，ESI or APCI，正离子 or 负离子模式。
  
• 样品的标签清晰明了，样品名称具有唯一性（建议是姓名缩写-日期-01，比如ljm-2023512-01），建议用圆珠笔书写，并用透明胶带粘贴。
  
• 必须填写送样单，并在共享中心网站提交送样申请，在指定时间段送样。
  
• 质谱送样时间统一安排在每周周一和周四下午2点-3点101实验室，必须由学生亲自送样，防止样品丢失。
  

高分辨质谱流动相和样品的制备正确与否对质谱图的质量至关重要，而且也会对整个LC-MS系统产生不利的影响。
高分辨质谱流动相要求：
1. 流动相的纯度必须非常高，通常需要使用HPLC级或更高级别的溶剂，以避免污染质谱检测器。水相通常使用超纯水或Milli-Q水（某些品牌的纯净水，必须经过实验验证），以减少离子和有机物的干扰。
2. 流动相的pH值需要根据固定相和待分析化合物的性质来调整，通常在2-8之间。使用缓冲液可以维持流动相的pH稳定，常用的缓冲液有挥发性的盐类如甲酸铵、乙酸钠等‌。为了在质谱中不留下残留物，流动相通常需要具有较好的挥发性‌。可能需要添加如甲酸、乙酸、氨水等以提高电离效率或改善峰形（所有的添加剂的级别也应该是HPLC级或者更高级别，禁止使用非挥发的添加剂）‌。
3. 流动相的粘度应适中，以保持良好的流动性和泵的性能。降低流动相的粘度可以通过提高温度的方法来实现。
4. 流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中或长时间保留在柱中。
5. 流动相不应与固定相发生化学反应，且不应与质谱检测器发生相互作用‌。
6. 流动相的沸点不应太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行‌。
7. 在流动相配制好后，一定要进行脱气，以除去溶解在流动相中的微量气体，防止流动相中的微量氧与样品发生作。
8. 流动相应在0.22微孔滤膜（必须质量要好，不能与流动相发生反应）进行过滤。
高分辨质谱样品要求：
1. 样品应为澄清透明液体，无悬浮颗粒，可以有颜色（透明，颜色不能太深），样品用12000r/min的离心机离心取上清，然后过0.22微米的滤膜（此步骤需要验证，因滤膜质量问题可能导致样品污染，进而影响质谱图的质量），如有条最好把样品瓶静置于4℃冰箱冷藏1小时，观察性状，如有沉淀，取上清，如有分层，取待测组分的部分。
2. 原则上高分辨质谱进样样品里各物质浓度应尽量小于1ppm，如无法精确配制时，请估算大致的浓度数量级，尽量ppm级，浓度不明最好先稀释十倍进样观察。
3. 样品的溶剂并无特殊要求（根据相似相溶原理，如有必要最好使用初始流动相溶解），但是良好溶剂如DMF，DMSO极易溶解样品配制中的塑料成分(枪头、薄膜、eppedof管)或者尼龙成(滤膜)、硅醇成分(垫片)，在质谱图上形成高聚物系列峰，干扰判断，请尽量避免出现此种污染，回避此类溶剂。
4. 样品一般是复溶于高品级的(色谱级或者质谱级)甲醇、乙腈或者水溶液（符合规定），化学纯或者分析纯的试剂中含有杂质，会干扰判断。
小结：无论是流动相还是样品必须遵循的原则：“净”，“干净”，“非常干净”。
仪器分析学苑知识星球技术咨询平台、测试耗材平台、色谱质谱交流群、智能体知识元问答

长长的路

高分辨质谱中常见的质量分析器有飞行时间质量分析器（TOF）和傅立叶变换离子回旋共振（FT-ICR）。
因为操作成本的关系，一般情况下，需要先做低分辨质谱（如四极杆、离子阱）摸索检测条件，然后才会上高分辨质谱进一步确定目标化合物的分子量。
如果前期摸索检测条件时配制的样品浓度是0.1mg/ml~1.0mg/ml，建议分别配制稀释1000倍（0.1μg/ml~1.0μg/ml）和100倍（1.0μg/ml~10.0μg/ml）后的样品溶液一起送样检测，从低浓度开始进样检测，如果低浓度的样品已经实现了检测目的，就不需要检测高浓度的样品了。
送检高分辨质谱时，之所以要尽量稀释样品溶液，从低浓度开始检测，一是因为仪器灵敏度很高，很容易就能检测出溶液中的目标物，进样高浓度的样品溶液容易造成仪器污染，这是很麻烦的事；二是因为高分辨质谱中的同位素信息是很重要的化合物鉴定依据，高浓度样品容易造成仪器信号饱和，会影响待测化合物的同位素分布形态。
以上是一般性原则，具体问题还要具体分析。

长长的路

跟一般的LCMS差不多。建议0.1～1mg/ml。当然也要看你检测的是什么物质，是小分子还是蛋白质核酸等大分子。是检测主成分还是检测杂质。