荧光定量PCR实验，科研实验

幸福侠侣

荧光定量PCR(Quantitative PCR, qPCR)，也称实时PCR(Real-time  PCR)或者实时定量PCR，是指借助荧光染料或荧光标记的特异性探针，在PCR指数扩增期间实时监测PCR反应体系中的荧光信号强度的变化，从而对目的基因进行定量分析的PCR检测技术。
该技术具有特异性强、灵敏度高、污染途径少、检测方法准确等特点，实现了PCR由定性到定量的飞跃，已成为国际公认的核酸定量的标准方法，广泛应用于基因表达丰度、拷贝数等研究及临床疾病检测等许多领域。
荧光定量PCR应用

• 相对定量PCR
  
• 绝对定量PCR
  
• 溶解曲线分析
  
• 高分率溶解曲线分析
  

实验步骤

核酸提取(RNA/DNA)-核酸浓度测定-反转录合成cDNA(RNA样品)-荧光定量PCR-实验结果分析
样品类型及样品量

细胞(≥1×106);
组织(≥100 mg);
血液(≥100μl);
DNA样品(≥2μg，OD260/OD280在1.7-1.9之间，完整性好);
RNA样品(≥2 μg，OD260/OD280在1.9-2.1之间，完整性好) ;
反转录的cDNA (≥2μg，纯度在1.9-2.1之间，完整性好)。
样品保存及运输

对于定量PCR检测：

• 组织样品液氮速冻后保存于-80℃;
  
• 细胞可以直接-80 ℃冰箱保存或加入Trizol后保存于-80℃;
  
• 后续样品需用干冰寄送。
  

注：样品需要注意避免各类污染和反复冻融(以免样品降解)。
我们提供

每个样品上机检测时开展三次平行实验，保证实验结果的准确性;
交付详细的检测报告(包括实验试剂、材料仪器、实验方法、实验结果及分析等);
可提供RNA或DNA的浓度数据，及qPCR的原始数据(包括熔解曲线和扩增曲线)。
隆科生物合作项目

• 分子生物学实验：荧光定量PCR检测、Western blot检测、血常规、生化酶活、ELISA检测等。
  
• 细胞实验：耐药细胞株构建、细胞毒性实验、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、细胞流式周期检测、细胞流式凋亡检测等。
  
• 动物实验：动物模型构建、动物饲养服务、动物临床前研究、药效评价、功能性评价等。
  
• 微生物学实验：抑菌试验、药敏试验、菌种鉴定、微生物多态性分析等实验。
  
• 病理检测：石蜡包埋、切片、HE染色、masson染色、番红固绿染色、天狼星红染色、免疫组化、免疫荧光单标/双标/多标、全景扫描、激光共聚焦拍照等。
  

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