ImageJ定量分析 WB 灰度值（详解版）

John

Western blot是显示蛋白丰度相对变化的半定量方法，通过分析信号强度，可以确定样本中目标蛋白的表达量相对于其它样本（如对照组、模型组）是增加还是减少。将目标蛋白条带发出的信号使用软件进行分析，计算出目标蛋白的相对定量值，即为WB定量。
对WB条带进行定量有两种方法——灰度分析和光密度分析。今天分享用Image J 定量分析 WB 灰度值（附完整操作步骤截图）
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Image J 安装可以戳之前发过的这篇文章↓↓↓

<hr/>WB灰度分析（Band density）

灰度是计算机图像分析仪根据图像颜色深浅分为256个级别。灰度值越小物体颜色越深。
Image J 分析灰度值操作步骤

打开Image J 软件，菜单栏选择File→Open（或使用快捷键Ctrl+O）→ 弹出对话框→选择目标文件夹→文件夹内找到WB条带图。



菜单栏选择Image→Type→8-bit，转化灰度图。


Process→Subtract Background，去除背景影响。


Rolling ball radius默认是50，在Light background选项进行勾选。


菜单栏选择Analyze→Set Measurements，在这里设置测量参数。


将需要分析的结果项勾选上，点击OK。

• Area（区域）
  
• Mean gray value（平均灰度值）
  
• Min & max gray value（最小和最大灰度值）
  
• Integrated density（集成密度）
  

菜单栏选择Analyze→Set Scale，设置单位。


Unit of length→【Pixels】，长度单位选择像素，之后点击OK。


菜单栏选择Edit → Invert，转换亮度，转为亮带。


在如下图所示的工具栏，选择区域选择工具，选中分析的单个条带。


菜单栏选择Anlyze→Measure，开始逐个分析。


所有结果分析如下图所示。
当测定完所有条带后，点击Results—File—Save as，导出Excel表格；也可选择Result中的“Edit”中的“Select All”,复制数据“IntDen”到Excel表格中进行分析。


对应研究基因和内参的IntDen，以研究基因/内参基因。在Excel表格中将目的蛋白灰度值除以内参蛋白的灰度值，进行归一化处理。


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