细胞培养基为啥是红色的？细胞生长缓慢该如何应对？

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细胞培育是一项细致且高度技术性的任务，涵盖了细胞的增殖、繁衍、传代及冷冻保存等多个步骤。每一步骤均需谨慎操作，以保障细胞的健康状态和实验的精确度。今日，小曼将为大家阐述细胞从复苏至传代再到冷冻保存的流程里，一些或许被忽视却至关重要的细节。

1、如何挑选细胞培养基？
若所购细胞来源于ATCC或其他细胞库，可直接咨询供应商或查阅相关文献资料；培养基的种类繁多，其中最为常用的有四种——MEM、DMEM、1640、F-12。具体可参阅本公众号往期文章《细胞培育必备！常见细胞系及对应培养基解析》、《细胞培养小贴士——常用培养基种类及配制方法》。
2、细胞培养基为何呈现红色？
细胞培养基通常呈无色透明状，但在特定情形下，它们可能会显现出红色或其他色泽。众多细胞培养基中添加了酚红作为酸碱度指示剂。酚红在不同的酸碱度环境下会呈现出不同的颜色，一般在pH值约为7.2时呈现红色。细胞代谢过程中产生的二氧化碳会降低培养基的酸碱度，致使酚红颜色转变为黄色。
3、细胞增殖迟缓该如何是好？
细胞增殖迟缓时，首先需检查细胞是否受到污染，若未受污染而增殖缓慢，可尝试提高血清比例进行试验。

4、细胞培养皿与细胞培养瓶有什么区别？
细胞培养皿：通常为扁平的圆形或方形器皿，有多种规格可选，如6孔、12孔、24孔、96孔等，适用于小规模细胞培养或实验。操作较为便捷，成本相对较低。

细胞培养瓶：通常为圆柱形容器，容量较大，如25平方厘米、75平方厘米、150平方厘米等，适用于大规模细胞培养或长期培养。安全性更高，成本相对较高。

在细胞培养状态方面，两者相差无几，若无特殊要求，选择培养皿即可满足需求。
5、细胞为何能够贴壁生长？
贴壁细胞之所以能够贴壁生长，是因为它们的生长和繁衍需要依附于固体表面。贴壁细胞表面存在多种分子物质，包括糖蛋白、整合素等，这些分子能够与培养容器表面的特定成分相结合。贴壁细胞之间通过细胞间连接（如紧密连接、桥粒等）相互作用，形成稳定的细胞层结构。通常，细胞培养容器的表面会经过特殊工艺处理，如涂覆一层蛋白质（如聚赖氨酸、纤连蛋白等），以增强细胞的附着能力。不同的细胞类型具有不同的贴附特性。例如，成纤维细胞和上皮细胞通常具有较强的贴附能力，而某些癌细胞或悬浮细胞则可能相对较难贴附。
6、细胞冷冻保存对细胞数量的要求是多少？
细胞冷冻保存对细胞数量的要求通常较高，以确保在复苏时有足够的存活细胞。根据搜索结果显示，细胞冷冻保存时，细胞密度应达到或超过90%，并且在冷冻保存管中细胞的起始浓度建议为每毫升10的6次方至10的7次方个细胞。这意味着在进行冷冻保存之前，细胞应在培养皿或培养瓶中生长至接近或达到这一密度水平，以保证在冷冻保存和复苏过程中有足够的细胞数量存活并减少因细胞死亡而造成的损失。

此外，冷冻保存液的配制也至关重要，通常包含基础培养基、血清和保护剂（如二甲基亚砜），比例可根据细胞类型和实验习惯进行调整，但常见的配方为基础培养基：血清：二甲基亚砜=7:2:1或其他比例组合。高浓度的血清有助于维持细胞活力并提高复苏后的存活率。在冷冻保存过程中还需遵循缓慢冷冻的原则以避免细胞内形成冰晶并减少细胞损伤。