实验技术｜常用DNA提取方法介绍

临床医师

根据DNA与RNA、蛋白质性质的差异及常用试剂的作用，可分为以下几种提取方法：
1. 浓盐法
根据DNA和RNA在电解溶液中的溶解度不同，可将二者分离。常用1 mol/L NaCl抽提，得到的DNP黏液中加入含有少量辛醇的氯仿一起摇荡，使之乳化，再离心，使蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA则位于上层水相中。回收水相，用2倍体积95%的乙醇可将DNA钠盐沉淀出来。
也可用0.15 mol/L Nacl溶液反复洗涤细胞破碎液除去RNP，再用1 mol/L的 NaCl提取DNP，然后用氯仿-异戊醇法除去蛋白。也可加入适量去污剂SDS使蛋白质变性、核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。在提取过程中，为抑制DNase对DNA的降解，在NaCl溶液中可加入柠檬酸钠作为金属离子络合剂。
2. SDS法
将生物细胞破碎后，加入SDS使细胞膜裂解，同时使蛋白质变性，将蛋白质和多糖等杂质与DNA分开，加入乙酸钾可使SDS-蛋白质复合物转变成溶解度更小的钾盐形式，使沉淀更加完全。
3. CTAB法
CTAB法是一种常用的提取植物等生物总DNA的方法。在细胞破碎后，即可加入CTAB分离缓冲液，将DNA溶解出来，再经氯仿-异戊醇抽提除去蛋白质，最后用乙醇沉淀得到DNA。
4. 苯酚抽提法
苯酚作为蛋白变性剂，同时可抑制DNA酶的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相，用乙醇沉淀DNA。
5. 水抽提法
利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，离心后收集上清液。在上清中加入固体NaCl调节至2.6 mol/L，加入2倍体积95%乙醇，立即用搅拌法搅出。然后，分别用66%、80%和95%乙醇以及丙酮洗涤。最后，在空气中干燥即得DNA样品。此法提取的DNA中蛋白质含量较高，可在提取过程中加入SDS加以改良。
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