一般细菌培养的方法有哪些？

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一般细菌培养的方法有哪些？
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细菌培养是微生物学中的一项基本技术，用于增加细菌的数量，以便进行进一步的研究或应用。根据不同的目的和条件，细菌培养的方法有很多种。以下是一些常见的细菌培养方法：
1) 平板划线法：这是最基本的细菌纯化方法之一。将单菌落或少量菌液用接种环在固体培养基（如琼脂平板）上划线，让细菌在平板上生长形成单个菌落，便于分离纯化。
2) 倾注平板法：将液体培养物与融化的温热培养基混合后倒入无菌平皿中，待凝固后在适宜条件下培养。此方法常用于计数样品中的活菌数量（CFU计数）。
3) 涂布法：将稀释的菌液均匀涂布在固体培养基表面，待干燥后培养，适用于菌液浓度较高的情况。
4) 斜面培养法：使用倾斜的固体培养基（斜面），将少量菌种接种在斜面上，让其生长。斜面培养法常用于菌种保存和初步扩大培养。
5) 肉汤培养法：在液体培养基中培养细菌，可以通过观察浑浊度来判断细菌生长情况。此方法适合大规模生产或快速增殖细菌。
6) 液体摇瓶培养法：在装有液体培养基的烧瓶中培养细菌，并通过摇床震荡提供氧气，促进细菌生长。
7) 厌氧培养法：针对不能在有氧环境下生存的细菌，使用厌氧袋、厌氧罐或其他厌氧系统来培养。
8) 微需氧培养法：针对那些需要低氧浓度的细菌，如某些肠道细菌，可以通过调整气体环境来进行培养。
9) 选择性培养基：根据特定目的，使用含有抑制剂的选择性培养基，允许某些细菌生长而抑制其他细菌，如大肠杆菌选择性培养基。
10) 鉴别培养基：用于区分不同类型的细菌，如伊红美蓝（EMB）培养基用于鉴别大肠杆菌。
11) 连续培养法：通过持续添加新鲜培养基和移除老的培养基来维持细菌的恒定生长状态，适用于工业生产。
这些方法的选择取决于所需的培养条件、培养目的以及细菌的特性。在实际操作中，通常会根据具体的需求选择合适的方法。

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细菌培养的方法主要包括以下步骤：

• 标本的采集：根据培养目的，选择适当的标本，如血液、痰液、尿液等。采集的标本应保证无菌，并且要适量。
  
• 增菌：如果标本中的细菌数量较少，需要将标本接种到培养基中进行增菌，使细菌能够生长繁殖。
  
• 划线分离：将增菌后的培养基上的细菌用接种环划线分离，使细菌能够分散生长，以便于后续的鉴定和计数。
  
• 培养：将划线分离后的培养基放在适宜的温度和湿度条件下进行培养，使细菌能够生长繁殖。培养时间根据细菌的生长速度和培养基的质量而定。
  
• 观察和鉴定：在培养过程中，需要观察细菌的生长情况，包括菌落的形态、颜色、大小等，并对细菌进行鉴定，确定其种类和特性。
  
• 计数：在培养结束后，需要对细菌进行计数，以便于了解细菌的数量和密度。
  
• 报告：将鉴定和计数的结果进行整理和分析，得出结论并撰写报告。报告中应包括标本的来源、细菌的种类、数量、密度等信息，以及相关的注意事项和建议。
  

细菌培养的方法有多种，其中常用的有固体培养基法、液体培养基法和气相培养基法等。根据不同的培养目的和要求，可以选择不同的培养方法。
细菌培养需要在严格的无菌条件下进行，以避免外来细菌和其他微生物对培养的细菌造成污染。在细菌培养过程中，需要对培养基、培养皿、实验室环境等进行消毒和杀菌，以确保培养的细菌纯净、无污染。常用的杀菌方法包括紫外线消毒、高温消毒、化学消毒剂消毒等。我们的过氧化氢银离子消毒 生态安全 高效广谱 有需要可了解

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细菌培养的一般操作及注意事项
一、实验目的
    细菌培养用于后续的细胞感染、动物感染、以及转化、蛋白提取、质粒提取等实验。

二、实验步骤(protocol)
(一)灭菌<必要的实验前准备>
1.常用灭菌方法:
    ①干热灭菌法:适用于玻璃材质的器皿。用称量纸与细菌培养的专用封口膜将试管口封住，于160℃灭菌2h；
   ②高温高压灭菌法:适用于塑料材质的器皿。在灭菌锅中进行，若对玻斑璃器皿进行灭菌，则会产生冷凝水，灭菌完毕后，宜置于60°C烘箱烘干。灭菌锅参数:121℃，30min。
2.需灭菌的器材:试管、培养皿、玻璃涂布棒、枪头盒。
(二) LB培养基配制  
1.根据说明书配方配制LB培养基(液态)与氨苄青霉素LB琼脂培养平板(固态),注意 PH调节。
2.参考配方:将胰蛋白胨 10g、酵母提取物5 g、NaCl 10g加入800mL去离水中，摇动容器直至溶质溶解，调PH至7.0，用去离子水定容至1000mL。高压蒸汽灭菌，冷冻保存(-20℃)备用。注意盛放液体培养基的锥形瓶内液面≤2/3（三分之二）
3.氨苄青霉素LB琼脂培养平板的制备
将琼脂粉1.5g加入100mL LB培养基中，高压灭菌，振摇使瓶内琼脂完全溶解，冷至40~50°C后，无菌条件下向并内加入50mg/mL氨苄青霉素100μL，超净台上将其倒入10mm的培养平皿中，一般倒15~20mL即可，室温下冷至琼脂凝固。
(三)菌种复苏
    拿到新的菌株时，注意鉴定是否含有杂菌，鉴定方法有：
    ①传统方法：用接种环将菌涂在玻璃薄片上，然后镜检细菌型态，参照文献记录和或说明书进行比对判断(菌液一定要稀释后再涂布染色,避免菌太密集
    ②全新方法：涂布固体培养皿，判断生长的是否是单一菌落，若察觉异常，则需要进行测序鉴定，挑一个单菌落，放在PBS或生理盐水的缓冲液中，送到测序公司测序，检定该菌是否是待培养的细菌，若鉴定结果是待培养菌则可进行细菌的扩大培养。
(四)细菌的扩大培养
1.细菌扩大培养可在液态培养基或固体培养基中进行菌液的室温融化即可。
2.单一菌落经稀释后放入液态培养基中,37℃恒温摇床120rpm摇菌（一般1：1000比例加入氨苄青霉素），不要过夜摇菌，可放在4℃冰箱保存。(细菌稀释经验推荐：稀释比例5%即| mL菌液加到20ml液态培养基)。
3.玻璃涂布捧在采菌时，先在酒精灯的火焰上烧一下，记住烧出的黑色物质需要去除后方能使用，然后把细菌用玻璃涂布捧涂在固态培养基上，37°C孵箱倒置培养。
(五)细菌的冻存
    将40%甘油与菌液以1：1体积比混合,即最终甘油浓度为20%。冻存用的菌液浓度宜高，避免冻存过程中的损耗。
(六)细菌的定量
   1.经验参数法：酶标仪检测菌液0D600nm,若D600mm≈0.4,则说明细菌数量约为5x10E8个
   2.逐级稀释法：不同菌株的经验参数值略有差异，因此首次对某一菌株进行定量时，应采用4000rpm，离心20min，收集菌液，取0.1mL菌液添加到9.9mLPBS/生理盐水中,得到1/100稀释比率溶液，经过3次稀释，最后一管的样品的最终稀释率为：1/1000000。
然后向固体培养基上涂布0.1mL的1/10E-6稀释液，生长的单菌落数为n个,则最初的样本中的细菌数为nx10E8个，计数方法如下:
    细菌数/mL=(最终平板菌落数/稀释率)÷涂布体积=(n/10E-6)÷01 mL=nx10E8 mL。
三、注意事项
1.超净台的玻璃门开到指示线位置即可，不可全开，打开风速按钮直到显示风速指标。每次实验完毕，需调节紫外照射时间，开紫外灭杂菌。
2.超净台中的移液枪不要外拿，所有外环境的物品放入超净之前都需要喷75%酒精灭菌。
3.实验产生的废液，加过84消毒液消毒之后，才可倒掉废液桶里。
4.加培养基，涂布菌液等实验操作时，培养皿宜靠近酒精灯侧，两端通风口易污染。
5.定期测序，谨防目的细菌养没了。
6.实验室的消杀宜交叉使用，防止细菌耐受。
7.培养皿放在孵箱之前最好在四与盖之间贴上几张医用白色胶布，避免拿出来时摔落。
8.细菌房穿的实验服切勿穿到细胞房去，避免交叉污染。