酶联免疫试剂盒（ELISA）检测原理是什么？

检验之星

酶联免疫试剂盒（ELISA）检测原理是什么？
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大力水手

基本定义
酶联免疫吸附法（elisa）：指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。
elisa基本原理
1971年，Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（酶联免疫吸附测定，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：1.使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。2.使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。反应的底物后，底物被酶催化转化有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
基本方法类型
常见的ELISA方法主要有以下几种：
1.双抗体夹心法；2.双抗原夹心法；3.间接法；4.竞争法；5.捕获法。
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三种必要的试剂：
1.固相的抗原或抗体；2.酶标记的抗原或抗体；3.酶作用的底物；
但是在实际生产中，根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。现就对菲恩生物ELISA试剂盒方法做一个全面介绍，希望客户在使用我们的产品过程中能更好的理解产品特性。
ELISA方法是在抗原抗体反应的基础上建立起来的一种检测方法，在实际应用中，由于抗体的特性，检测目的分子的类型，实验室条件限制等因素，设计出最优的检测方法。

队长是我

本视频介绍了酶联免疫吸附实验ELISA实验原理(直接法，间接法，竞争法，夹心法)以动画的形式展示原理

大力水手

作为应用最为广泛的生化检测方法之一，ELISA是人类步入快速生化检测的一个里程碑。本期视频叨叨就介绍了ELISA的生物化学原理。但ELISA目前仍然具有一定的局限性，接下来我们会聊到为什么“滴血验癌”的女版乔布斯因为诈骗被定罪。感兴趣的小伙伴赶紧关注起来吧！

大力水手

ELISA的基本原理有三条：
（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；
（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；
（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
由于ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而，具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一种既敏感又特异的方法。
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卡卡

以人白介素6(
IL-6)为例，说明ELISA实验检测原理。
本实验采用双抗体夹心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为抗人白介素6(
IL-6)单克隆抗体。检测相抗体为
多克隆抗体，经
生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入
过氧化物酶标记的
亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成
蓝色，并在酸的作用下转化成最终的
黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。