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[分享] 轻松拿捏质粒构建

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发表于 2024-11-25 08:50 | 显示全部楼层 |阅读模式

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质粒(plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒作为低等生物体内的最小遗传单位,具有分子量小、复制速度快等诸多优点,是分子生物学实验中不可缺少的工具载体。

01点突变

点突变指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征,是基因研工作中一种非常有用的手段。

点突变技术的潜在应用领域很广,比如研究蛋白质相互作用位点的结构、改造酶的活性以及动力学特性,改造启动子或者DNA作用元件,引入新的酶切位点,提高蛋白的抗原性或者是稳定性、活性,研究蛋白的晶体结构,以及研发药物、开展基因治疗等。

02PCR克隆



PCR克隆是根据客户提供的模板克隆序列,设计扩增引物将目标区段PCR产物克隆到新的载体特定位点上,并测序验证。与亚克隆不同,PCR克隆在进行克隆的过程中就DNA片段的两端引物结合区可以引入序列修饰,因而适用范围更广,相应的实验难度也更高一些。

MDL可以在不依赖载体酶切位点的基础上,帮助客户将目的基因克隆到所需载体的任意指定位点,满足客户的各种克隆设想方案,并相对于普通克隆大大节省了时间。对于不同基因片段的同载体克隆,我们也可以高效完成高通量亚克隆服务。

03亚克隆

亚克隆是指现有的模板序列,通过已有的酶切位点将其从一个载体上转移到另一个载体上,所以又称为转载体。在特定DNA片段的克隆过程中,其序列(包含酶切位点(没有明显的变化。

亚克隆是分子生物学中最常见,应用最普遍的实验技术,亚克隆是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆,从而对目的片段进行进一步分析,或重组改造等,广泛运用于生物学的各个实验领域。
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