免疫共沉淀实验

生物医药

Co-IP全称Co-Immunoprecipitation，中文学名免疫共沉淀，是一种以抗体和抗原识别专一性为基础，用于研究蛋白质之间相互作用的经典方法。



实验流程

样本制备

细胞样本：收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液和蛋白酶抑制剂冰上裂解，超声破碎，离心取上清。

组织样本：剪碎组织，按组织量加入裂解液和蛋白酶抑制剂，匀浆器匀浆，直至充分裂解，离心取上清。

细胞裂解

物预清除

(选做)

向制备好的裂解物中分别加入一定量的protein A和protein G，4℃旋转孵育后，离心取上清。（目的是去除样本中能和琼脂糖珠非特异性吸附的杂质，使得后续结果更完美）

加入A蛋白的IP抗体

按照抗体网站推荐的使用比例，添加一定量的A抗体(能适用于IP实验)，4°C轻柔混合过夜。

免疫复合物沉淀

加入一定量的Protein A和Protein G，4℃ 温和地混匀1-3小时或过夜，离心保留沉淀，并清洗沉淀3次。（注意：清洗去上清的时候需要避免吸走填料）

洗脱与检测蛋白

根据样本的性质和下游检测手段，选择合适的洗脱缓冲液，使用洗脱缓冲液将互作蛋白复合物与珠子分离。接着进行下游检测实验。



免疫共沉淀实验的应用：

01测定两种目标蛋白质是否在体内结合。

02确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

03分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。