质粒提取原理和方法

生物医药

虽然质粒提取是非常简单的操作，但是很多人对于其中的原理并非清楚。只知道在使用试剂盒的时候，加入溶液1，2，3，不知道溶液中含有的具体成分，也不清楚，每一种成分所起到的作用。
细胞中存在蛋白质，chromsomal DNA，plasmid DNA，RNA，我们的目的是把质粒DNA给提取出来，而且不能掺杂其他的生物大分子。蛋白质可以让它沉淀，RNA可以加入RNase降解，可以看出，质粒提取最关键的问题是如何把chromosomal DNA和plasmid DNA给区分开来。
细菌没有细胞核，只有一个拟核（nucleoid），chromosomal DNA是环状的，但是并非裸露的，上面结合有多种NAPs(nucleoid-associated proteins)。NAPs和基因转录活性可以改变拟核的形态结构。相对之下，plasmid DNA就要简单很多，游离于细胞质中，以共价闭环cccDNA（convalently closed circular DNA ）的形态存在。
质粒提取主要包括三个步骤：菌体扩繁、菌体裂解释放质粒DNA，和质粒DNA的分离与纯化。质粒提取主要有碱裂解法，煮沸裂解法，小量一步提取法等。
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