初学者速看！ELISA实验常见问题8问8答

生物科研实验室

1.ELISA实验耗时多久？

A: 双抗体夹心ELISA法约需3.5-4小时，而竞争ELISA法则需2-2.5小时完成。

2.血清样本应如何处理？

A: 全血标本需室温静置2小时或4℃过夜，随后以1000×g离心20分钟，小心收集上清液。若保存期间出现沉淀，需再次离心处理。

3.血浆样本处理步骤是什么？

A: 推荐使用EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，以1000×g离心15分钟，仔细收集上清。若保存时产生沉淀，需重复离心步骤。

4.如何处理细胞上清液样本？

A: 检测分泌性成分时，使用无菌管收集样本，并以1000×g离心约20分钟，小心收集上清液。

5.细胞裂解液样本的处理方法是什么？

A: 检测细胞内成分时，需用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞至约100万/ml，通过冻融或超声破碎使细胞破裂，释放成分。之后以5000×g离心约10分钟，仔细收集上清。若保存期间有沉淀生成，需再次离心。

6.组织样本应如何处理？

A: 首先用预冷的0.01M PBS (pH=7.4)清洗组织，去除残留血液，剪碎后按1:9（重量:体积）比例与PBS混合（可根据实验需求调整）。建议在PBS中加入蛋白酶抑制剂，使用玻璃匀浆器在冰上充分研磨，可进一步超声破碎或冻融处理。最后，以5000×g离心5-10分钟，取上清进行检测。

7.为何部分试剂盒采用竞争ELISA法？

A: 小分子抗原或半抗原因缺乏足够的位点进行双抗体夹心检测，故采用竞争法。其原理是样本抗原与固相抗原竞争抗体结合位点，样本抗原越多，固相抗体结合越少，显色越浅，即显色与样本抗原浓度成反比，适用于小分子激素等检测。

8.推荐使用哪款软件处理ELISA数据？

A: Curve Expert软件是处理ELISA标准曲线的优选工具，操作简便，能生成高质量曲线用于论文发表，可从下载中心获取。