做ELISA实验时有什么注意事项么，感觉自己的实验结果总不太好？

奋斗的小鸟

做ELISA实验时有什么注意事项么，感觉自己的实验结果总不太好？
原文地址：https://www.zhihu.com/question/2120408589

感恩由您

做ELISA实验有以下注意事项：
实验前
- 试剂准备：确保试剂盒在有效期内，且按说明书要求储存。使用前试剂要恢复到室温，比如酶标试剂，温度过低可能影响其活性。
- 样本处理：血液等样本要正确采集和处理，避免溶血等情况影响检测结果。如果是血清样本，离心条件要合适，以获得清亮无杂质的血清。
实验中
- 加样：加样要准确，使用移液器时要确保量程合适并且校准准确。加样时枪头不要碰到孔壁，避免交叉污染。
- 温育：严格控制温育的温度和时间。比如37℃温育时，温度波动不能太大，时间要按照说明书要求精准控制，温育时间过短或过长都可能导致显色异常。
- 洗板：洗板很关键，要确保充分洗涤，去除未结合的物质，但也要避免过度洗涤造成抗原 - 抗体复合物解离。通常用洗板机洗板，要保证洗板机正常工作。
实验后
- 显色：显色剂的量和反应时间要控制好。比如TMB显色液，加入量要准确，显色时间过短颜色淡，过长可能会出现本底过深的情况。
- 比色：使用酶标仪比色时，要先对酶标仪进行校准，确保波长等参数设置正确。

感恩由您

1)加样：加样速度尽量要快，避免酶标板干燥。加样时，移液器垂直向下，加在包被孔的底部，同时避免碰壁触底。
2)孵育：孵育温度严格控制在37°C，不可过高或过低。孵育时，将酶标板封闭完好，避免将酶标板放在环境温度变化大的地方。避免酶标板堆叠。
3）洗涤：洗液需要现配现用，配制洗液应用新鲜的和高质量的超纯水或双蒸水。洗板机洗板时，保证洗液注满各孔，洗板针畅通。手动洗板时，加洗液要快速，没有多道移液器可以使用洗瓶，浸泡后甩板倒液要迅速千脆，倒液后在吸水纸上拍板。需要用力拍板，使孔内没有可见液体挂壁，但也不能太重，不能让样品干太久。洗板时，每孔至少加300ul洗液。
4)显色：肉眼可见标准品前3-4孔有明显的梯度蓝色时，就可终止反应。加终止液时避免出现气泡。
5)数据处理：可以在正规生物公司官网免费下载专业ELISA绘图软件。