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[分享] PCR技术是在细胞内还是细胞外?

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发表于 2024-11-11 21:08 | 显示全部楼层 |阅读模式
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发表于 2024-11-11 21:08 | 显示全部楼层
扩的是核酸,或者cDNA
就算你是快速扩增试剂盒之类,必定不是原位,必定是细胞破碎了游离出来的片段
那么何来细胞之说?
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发表于 2024-11-11 21:09 | 显示全部楼层
刚刚看到一个叫仪器信息网的回答,简直错误百出。
PCR叫做聚合酶链式反应,一般我们会对DNA进行提取作为反应模板。
也就是回答你的问题:PCR技术是在细胞外的。
我们利用相应的引物,对DNA进行扩增。具体分为:变性,退火,延伸三个步骤。
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发表于 2024-11-11 21:10 | 显示全部楼层
题主问题有些地方描述的不够准确。
PCR技术是将提纯的核酸在体外扩增(所以是细胞外),而PCR仪器所作用的核酸本身是在细胞内部的。
一、PCR技术

PCR技术也叫聚合酶链式反应,1985年由美国化学家Kary Mullis发明,这种方法通常也叫做简易DNA扩增法。
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环变性-退火-延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
二、核酸的提取

研究核酸的前提是获得纯化的核酸,由于核酸位于细胞内或细胞核内,核酸提取首先就要破碎细胞,使核酸释放出来,再去除与核酸结合的蛋白质、细胞浆中的多糖、脂类等生物大分子,去除盐类、有机溶剂等杂质以及其它不需要的核酸分子,最后获得纯化核酸,以便于后期的分子生物学研究。
三、生命科学仪器分类

从仪器的角度上说,生命科学的研究范围从小到大分成:
1、分子生物学
2、细胞生物学
3、动物生理、病理学
4、植物生理生态学
5、临床检测
6、通用仪器(不分大小)
可以简单的理解为:基因——蛋白——细胞——微生物——动物/植物——人
四、分子生物学仪器

分子生物学就是研究生物大分子之间相互关系和作用的一门学科,而生物大分子主要是指基因和蛋白质两大类。所以分子生物学包含了基因组学蛋白质组学两大类。


PCR,也叫基因扩增仪,负责目的基因的扩增,属于”分子克隆仪器“。
五、细胞生物学仪器

细胞生物学是从细胞整体、显微、亚显微和分子等各级水平上研究细胞结构、功能及生命活动规律的学科。按照细胞生物学的研究方法与技术,可以将细胞生物学仪器分为细胞形态结构观察仪器,细胞鉴定、分离仪器和细胞功能研究仪器。


六、结论:

我们都知道,基因是指带有遗传信息的DNA或RNA序列。
DNA存在于细胞核(细菌在拟核,病毒在蛋白质外壳内),线粒体,叶绿体(植物的话)
而RNA存在于细胞质(病毒在蛋白质外壳内,有DNA就没有RNA)。
所以,综上所述,PCR技术是将提纯的核酸在体外扩增(所以是细胞外),而PCR仪器所作用的核酸本身是在细胞内部的。
科学仪器实战宝典:PCR篇=============

如有不周,敬请指正。
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发表于 2024-11-11 21:11 | 显示全部楼层
它是分子层面的(对核酸),跟细胞不是一个纬度的吧
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