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Sanger测序本质就是合成终止测序,根据电泳区分合成终止后的片段长度来确定四个碱基的出现位置:
现代的Sanger测序仪与几十年前手动电泳跑胶的原理是一样的,只不过新材料与技术的使用使得电泳可以批量在微管里进行,而省去了人工跑胶看胶的过程。
既然使用了电泳,那么就受电泳技术的限制。首先电泳你不能跑太久,DNA又不是100%稳定的东西;其次越是长的片段跑的越慢,相差1bp的片段电泳峰相差很小,有限电泳时间内难以区分,所以电泳对片段进行区分的本质就限制了Sanger测序的读长。 |
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