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[分享] 蛋白消光系数测定:生物分析的关键参数

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发表于 2024-11-11 08:13 | 显示全部楼层 |阅读模式

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蛋白消光系数是衡量蛋白质在特定波长下对光的吸收能力的参数。它对于生物分析非常关键,特别是在蛋白质浓度的测定、蛋白质纯度的评估以及蛋白质与其他分子相互作用的研究中。
蛋白消光系数(也称为摩尔消光系数)表示在1M的浓度下,蛋白质1 cm厚的溶液在特定波长下的吸光度。其常用单位是M-1cm-1或L mol-1cm-1。
1.蛋白质浓度测定: 通过测定溶液的吸光度并使用已知的消光系数,可以准确地计算蛋白质的浓度。
2.蛋白质纯度评估: 消光系数可以帮助评估蛋白质样品中可能存在的杂质或污染物。
3.蛋白质-配体结合研究: 在研究蛋白质与小分子、药物或其他蛋白质的相互作用时,消光系数可以用于计算结合常数和热力学参数。
1.理论计算: 基于已知的蛋白质序列,可以预测其在280 nm波长处的消光系数。这主要基于蛋白质中色氨酸、酪氨酸和半胱氨酸的含量,因为这些氨基酸在280 nm处有强的吸光性。
2.实验测定: 根据Lambert-Beer定律,当一束单色光透过流动池时,若流动相不吸收光,则吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。因此,只需测得蛋白的绝对含量和1 cm 光程下供试品在 UV 280 nm 波长下的消光值即可用公式ℇ=A/cl计算蛋白的消光系数。
1.蛋白质状态: 蛋白质的结构、构象或氧化状态可能会影响其消光系数。
2.杂质: 样品中的其他物质,如盐、溶剂或其他杂质,可能会影响吸光度测定。


图1

原文地址:https://zhuanlan.zhihu.com/p/721958931
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