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在全球范围内应对突发传染病疫情期间,病毒的筛查、研究以及疫苗开发工作至关重要,病毒核酸提取是其中最基础的环节,也是一项不小的挑战!
病毒核酸提取的难点 ● 病毒的特殊性质
病毒的遗传物质通常被包裹在蛋白质外壳中,这要求提取过程能够有效地破坏这一结构以释放核酸;
病毒的高变异率导致其遗传材料存在多样性,提取方法需要适应这种多样性以确保广泛适用性。
● 样本来源的复杂性
临床样本中的复杂组成,可能干扰病毒核酸的提取和纯化,且临床样本中常常含有PCR等实验的抑制物。
● 提取过程富有挑战
提取过程需确保病毒核酸不会被降解,这通常需要避免核酸酶的污染和适当的保存条件,且为达到高纯度和高得率的核酸,提取技术至关重要。
应对各种病毒检测和研究需求,
BEIWO医学帮您选择理想解决方案!
【BW-MR6536】
DNA/RNA提取试剂盒(磁珠法)
试剂盒介绍 MR6536利用独特的裂解缓冲体系对拭子保存液、组织匀浆、病毒培养液、全血、血浆、血清、脑脊液、支气管肺泡灌洗液、尿液等体液样本进行裂解处理,而后使 用特殊包被的超顺磁性纳米微球特异性吸附裂解得到的病毒DNA(非洲猪瘟病毒 ASFV、乙肝病毒HBV、单纯疱疹病毒HSV等)或病毒RNA(新冠病毒SARS-Cov-2、流感病毒等),进而在外部磁场作用下,采用手工提取或自动化设备提取的方式进行快速纯化,得到高纯度病毒核酸可用于下游检测使用。
提取用途 用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。其处理后的产物用于临床体外检测使用。
数据支撑看得见 qPCR实验结果
注:荧光定量Ct指样本当中核酸含量的浓度,一般大于35定量为Nt(无模板样本)。
使用疑难解答 问题1:磁珠残留
原因1:手动提取时候吸磁珠步骤时间短或者仪器程序设置错误或者仪器与预装板不是配导致磁珠残留在洗脱液中,建议增加吸磁珠时间,或者将最后样本洗脱液进行12000rpm、4℃、离心3min。
问题2:纯度低
原因1:样本裂解不充分。
样本与Proteinase K混合不充分,导致孵育处理样本裂解不完全,建议充分混匀。
原因2:盐类及蛋白污染。
洗涤时候程序设置力度太小,导致洗涤不充分,按说明书使用 wash Buffer洗涤两次并且程序设置按照说明书设置,尽量去除残留的离子;
裂解不充分,样本量过多,导致裂解不充分;
Proteinase K常温放置导致酶活力失活,建议放置在-20℃保存。
原因3:乙醇残留
磁珠晾干过程太短,建议增加晾干时间室温晾干5min,机体晾干可以设置到90s。
原因4:血液样本中存在杂质
吸取样本时候如看到明显颗粒状杂质,建议去除,以免影响提取效果。
问题3:得率低
原因1:样本量太少。
提取样本量太少,建议增加样本量,或者提取全血样本浓度太稀,建议可以增加样本量。
原因2:洗脱不完全。
洗脱液温度低,建议按照说明书操作提取放置55℃水浴锅加热;
洗脱不完全,磁珠与样本混合不充分,导致磁珠未能完全结合基因组;
洗脱液体积少:洗脱温度设置太高,导致洗脱体积减少或者手动提取时候加入的洗脱液太少,导致洗脱得率低,建议按照说明书50-100ul洗脱。
原因3:混合不充分
手提过程中或者机体过程中混合不充分导致磁珠结合不完全。
问题4:跑电泳条带降解
建议跑电泳时在冰面上跑胶,可以避免RNA在跑电泳过程中因为温度太高降解。
在科研道路上,每一次实验的成功都离不开背后的精心准备和正确选择。
让试剂盒成为您实验台上不可缺少的帮手,提取质粒不再是问题,科研之路,我们与您同行!
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