RNA的提取中为什么要先加异丙醇再加乙醇？

风云

RNA的提取中为什么要先加异丙醇再加乙醇？
原文地址：https://www.zhihu.com/question/64552311

卡卡

技术世界第一！复杂多糖多酚复杂植物RNA提取
提取时间：8min（世界上最快速！）
操作过程无需DNA酶消化(利用基因组清除技术)，无需使用酚、氯仿以及β-巯基乙醇，对实验操作人员友好。

https://zhuanlan.zhihu.com/p/695165349?utm_psn=1768223037386776576

清风寡欲

估计我毕业了唯一学到的东西就是提RNA了。因为跑基因序列需要高质量RNA，而RNA由于其特殊的单链结构真tm太太太容易降解了。我一般用triozl试剂来提。先加氯仿（三氯甲烷）吧，氯仿主要来分层的呀，但也有变性蛋白质的作用，当然有机试剂是很容易挥发的啦，用的时候也要小心毒性，分层后只能吸取上清啊，（RNA存在于水层相中）宁可少吸不要多啊，多了就会产生蛋白污染了。先加异丙醇是因为它可以通过羟基的疏水作用使得RNA链中的亲水基团受到保护，而且RNA不溶于异丙醇，可以用来沉淀啊，最后乙醇是起到洗涤的作用，一方面却可以溶解一些沉淀中可能的有机无杂质，另一方面可以洗掉异丙醇、氯仿试剂，还可以溶解一部分蛋白质，最后有很容易挥发，所以一般后面步骤都要重复2-3次乙醇洗涤。
啊，我一年提RNA的经验就是宁可少吸不可贪婪。最好早早去实验室提取或者就通宵吧（高端大气上档次一人一间实验室的当我没说），避免人员走动，真的超m容易降解啊！！！！！最后全程使用无酶用具吧，包括电泳的buffer！否则你需要高质量的RNA是很难实现的。
好像有点跑题！但我真的提了一年的RNA，就是只提RNA！！！看见RNA我就不淡定！！！

检验医师

抽RNA如果希望得率高，可以先加入NaCl或醋酸铵，再加异丙醇，-20度醇沉过夜。第二天离心去上清，用乙醇洗两遍。
下面说原理：
1. 把溶液调成高盐：
盐离子和RNA抢水，破坏RNA的水化层，导致RNA和水的亲和力降低，方便醇沉。
如果你的RNA少，醇沉不出来，推荐加盐。
有次体外转录RNA，手边RNase free的高盐溶液用完了，省了这步，就没醇沉出RNA。第二天重做，加了盐，RNA就出来了。
2. 先用异丙醇醇沉：
异丙醇和RNA抢水，破坏RNA的水化层，导致RNA析出沉降。
异丙醇羟基多，抢水能力大于乙醇，醇沉效果更好。
但是，异丙醇挥发性远远低于乙醇，很难晾干。
3.后用乙醇洗两遍：
乙醇可以带走高盐留下来的盐离子，带走挥发不干净的异丙醇，带走醇沉时同样析出的蛋白质和脂类。
乙醇挥发快，很快就能干，是异丙醇比不了的优点。
具体步骤，可参考NEB E2050说明书的RNA纯化。
评论区有人说搜不到，可以百度NEB，进入NEB主页，搜索E2050，进入产品页，下载PDF。
具体步骤和原理，也可参考分子克隆指南。尽管这书特别有用，不过我猜很多人都没兴趣翻这本大部头。

感恩由您

我是用氯化锂溶液沉淀的，效果也不错，就是要超低温冰箱久一点。