甲基化是在DNA甲基转移酶(DNA Methyltransferase, DNMT)催化作用下, 利用S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)提供甲基,在CpG二核苷酸中胞嘧啶嘧啶环的五号碳原子上加上甲基的共价修饰过程。DNA甲基化修饰现象广泛存在于多种有机体中,是最早发现的修饰途径之一,是表观遗传学(Epigenetics)的重要组成部分。甲基化特异性PCR(Methylmion
Specific
PCR,MSP)及其改进方法是检测基因甲基化的经典方法。MSP法的原理是首先用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶都被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应(PCR)扩增,最后通过琼脂糖凝胶电泳分析,确定与引物互补的DNA序列的甲基化状态。
样品要求1、请寄送足量的并且保证纯度的基因组DNA(浓度在500ng/μl以上,体积在20μl以上)。2、如果提供的材料为细胞或组织,DNA的提取费用另收。 3、同时应保证材料新鲜,动物细胞数为10E6以上,动物组织为100mg以上。 |