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[分享] DNA探针是什么?

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发表于 2024-11-6 23:07 | 显示全部楼层 |阅读模式
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发表于 2024-11-6 23:07 | 显示全部楼层
365nm紫外交联仪UCL-3200L操作规程

1、按照紫外辐照能量
  首先按压“program"键,这时会亮起ENERGY相应的绿灯,通过数字按键输入能量值(J/cm2),然后按enter按键,这样需要辐照的能量设置完成,按star按键,辐照开始,显示屏显示剩余辐照能量,当辐照能量为0时,辐照结束,蜂鸣器连续响3声。
也可以按照预先存储的能量值进行辐照,操作顺序如下,按压“program"按键,绿色led灯亮,按压“PRESET"按键,黄色指示灯亮,按预先存储的能量值的存储位置的数字按键,存储的1能量值在显示屏上显示,按star按键,辐照开始。
2、按照辐照时间进行设定
  首先按压“program"键,选择对应的“TIME" led红灯亮,通过数字键盘输入需要辐照的时间(时间模式为:XX分xx秒,大为599.5分钟),按enter按键确认,按star按键开始辐照,显示屏显示剩余时间,辐照结束会有蜂鸣音提醒。
也可以按照预先存储的时间进行辐照,操作顺序如下,按压“program"按键,红色led灯亮(TIME),按压“PRESET"按键,黄色指示灯亮,按预先存储的时间的存储位置的数字按键,存储的时间值在显示屏上显示,按star按键,辐照开始。
对“START"键进行按压,当亮起紫外灯之后,设定好的强度和时间数值逐渐减少的情况能够被看到,当结束曝光以后,会有蜂鸣音对结束进行提示。




365nm紫外交联仪UCL-3200L的注意事项

1、首先在工作台上水平放置紫外交联仪UCL-3200L,空间需要确保足够,门在在设备前面开,把交联仪的电源线母头插入交联仪背面的插孔内,再正确接地的电源插座中插入插头。
2、在产品信息的标签上能够找到紫外交联仪的正确的工作电压,对于型号230V或者需要特殊的电源线连接器,需要对正确的配置连接器或插头有所保证,确保电源线已经正确的连接。
3、将ON/OFF开关移到ON的位置。当紫外交联仪的默认显示前一次使用的紫外线曝光设置。
4.长时间不用请务必将电源线从插座拔下。
5.交联仪的紫外线灯管应定期更换。
6.如果紫外交联仪不通电,请检查电源线插座旁边的保险丝是不是已经熔断。
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发表于 2024-11-6 23:08 | 显示全部楼层
简单说DNA探针就是一段带有标记的DNA片段[1]。这个标记可以是放射性标记,也可以是荧光标记。其中被广泛使用的地高辛标记探针就是一种荧光标记探针。把标记的原料掺入到PCR体系中,用PCR的方法可以得到地高辛标记的探针(有专业的试剂盒),做好的探针使用后还可以回收再次利用。



图1:DNA探针示意图,图片来源[1]

DNA探针是一段DNA序列,可以检测与其相同DNA片段或者与其碱基互补配对RNA片段。这就是DNA探针的主要应用:检测核酸
无论是检测DNA分子的Southern blot,还是检测RNA的Nouthern blot,其过程都需要DNA探针,原理是核酸的碱基互补配对原则[2]。



图2:分子杂交示意图,图片来源[2]

在Southern blot中,由于DNA大都是以双螺旋的形式存在,所以在使用DNA探针时,需要将探针和被检测DNA先变性为单链,然后再进行分子杂交[3]。



图3:Southern blot与Nouthern blot示意图,图片来源[3]

检测mRNA有点不一样,由于mRNA一般以单链形式存在,且没有tRNA和rRNA那样的复杂空间结构,因此可以直接使用变性的单链探针进行检测mRNA。
荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)操作过程中,DNA仍以双链存在,不会与单链的探针结合,因此无需对细胞进行变性处理就可检测细胞中的mRNA。下图中红色表示的为单链的探针,蓝色表示可与探针配对的RNA,绿色表示不与探针配对的RNA,DNA未做标注。



图4:FISH示意图,图片来源[2]

还可以更厉害些。来上千甚至上万个探针组成DNA微阵列(DNA microarray),或者按照高中课本的说法称为基因芯片(genechip)。



图5:基因芯片示意图,图片来源[2]

上图中,表达A基因的显示为红色,表达B基因的显示为绿色,两种均表达的显示为黄色。配合计算机分析,基因芯片可以用于基因检测,对基因序列进行分析等超大量的工作任务。
综上,DNA探针是一段带标记的DNA片段,可以与核酸检测,双链是DNA探针的保存状态,单链是DNA探针的工作状态。
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来做道题。
检测DNA的分子杂交技术称为Southern blot,检测RNA的分子杂交技术称为Nouthern blot。问题来了,检测蛋白质的抗原抗体杂交技术对应的英文是啥?
恭喜你猜对了,答案是Western Blot。
哈哈哈哈,生物学真有意思(……个屁)!
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发表于 2024-11-6 23:08 | 显示全部楼层
DNA探针通常是指可通过互补配对结合于目标区域DNA/RNA的寡脱氧核糖核苷酸(oligo-deoxynucleotide)片段。
如下图:Target DNA就是我们通常感兴趣的DNA片段,通常是基因组DNA上的某一段序列。DNA probe就是探针,通常是通过化学方法合成的。(图中的label是以放射性同位素的标记)

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发表于 2024-11-6 23:09 | 显示全部楼层
简单来说:就是一段可长可短的被标记了的我们已经知道序列的单链或者双链的DNA,它在适度条件下变性复性,去与我们的待测样品(非标记的单链RNA/DNA)发生配对,形成双链复合物。完后自显影检测就可以了。
这个探针可以让我们判断是否有我们要找的目的基因。
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发表于 2024-11-6 23:09 | 显示全部楼层
用于DNA或RNA杂交
通俗来讲就是看看待测基因有木有你想的那段序列。生活中使用的地方很多,追犯人看是不是亲生的什么的都用这个。
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