胶体金技术常用方法

病理医师

胶体金技术是一种将抗原抗体免疫反应与胶体金标记示踪技术结合用于抗原、抗体含量定性定量检测的技术。由于其快速、简便、成本低、稳定性好等优点,胶体金法检测在临床检测领域得到了广泛的应用。
目前,胶体金检测平台常用的检测方法有双抗夹心法、竞争法、间接法等,不同检测方法检测原理及适合检测的物质不同,下面分别对这些方法做一介绍。
双抗夹心法
双抗夹心法是胶体金检测平台最常用的检测方法,主要用于检测比较大的生物分子及颗粒性抗原。双抗夹心法需要准备待测抗原的配对抗体,一个抗体用胶体金标记并固定在结合垫上,另一个抗体固定在NC膜的检测线(T线)上。另外,还需要准备能与金标抗体(即胶体金标记抗体)特异结合的二抗并固定于NC膜的控制线(C线)上。


当待测样品液体滴加到试剂条上后,通过层析作用,液体依次会运动至结合垫、T线、C线,每个阶段的反应如下表所示:


因此,当试剂条上显示两条红线时,表示样品中待测物质呈阳性;当试剂条上只有一条红色时,表示样品中待测物质呈阴性。待测物质浓度越高,T线显色强度越强。
竞争法
小分了抗原很难制备得到配对抗体(分了量小,很难找到两个结合位点供两个抗体同时结合),因此小分子抗原无法用双抗夹心法进行检测。
对于小分了抗原,通常利用竞争法进行检测。使用竞争法的胶体金检测平台,在试剂条的结合垫上固定的是金标抗体,NC膜上T线固定的是大分子偶联的待测抗原(小分子抗原不能直接固定于NC膜上,因此需要通过化学方法把小分了偶联到BSA等大分了物质上再固定与NC膜上),C线上固定的是能与金标抗体特异性结合的二抗。


当待测样品液体滴加到试剂条上后,通过层析作用,液体依次会流经结合垫、T线、C线,每个阶段的反应如下表所示:


因此,如果试剂条上有两条线,则说明样品中待测物质呈阴性;如果试剂条上有一条线,则说明样品中待测物质呈阳性。样品中待测物质浓度越高,T线显色强度越弱。
间接法
间接法主要用于检测抗体。如果胶体金检测平台使用的是间接法,则试剂条的结合垫上固定的是带有胶体金标记的ProteinA (ProteinA能够与抗体非特异性结合),NC膜上的T线固定的是能与待测抗体特异性结合的抗原,NC膜上的C线固定的是抗Protein A抗体。


当待测样品液体滴加到试剂条上后,通过层析作用,液体依次会流经结合垫、T线、C线,每个阶段的反应如下表所示:


因此,如果试剂条上有两条线,说明样品中待测物质呈阳性;如果试剂条上有一条线,说明样品中待测物质呈阴性。样品中待测物浓度越高,T线显色强度越强。

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