请问如何做肺组织的流式细胞？

John

我们想做小鼠肺部组织的流式，但是组织如何变成单细胞悬液这一步总是做不好，要么就是损失太大了，要么就是没有变成单细胞堵了，请问各位大神有没有做过类似的，应该怎么做呢？

原文地址：https://www.zhihu.com/question/430546009

大力水手

单细胞悬液是把组织块或贴壁培养的细胞消化吹打以后形成的悬液，使粘连的细胞都分开。
而高质量的单细胞悬液通常具备活性高、无结团、碎片少的特性。
今天我们来看一下如何研磨脾脏获得高活性的单细胞悬液：
一、将脾脏取出，用10X双抗的PBS冲洗2次确保无菌；
二、将3.5cm皿中装入1ml 10X双抗的PBS，将脾脏放置其中用无菌注射器活塞尾部讲脾脏捣碎；
三、将处理过的脾脏转移到细胞筛上，细胞悬液经细胞筛过滤到15ml 离心管中1500rmp 离心5min，离心时用CD3进行培养皿包被；、
四、弃上清，加入1ml红细胞裂解液裂解悬重细胞后静置2min，加入3ml PBS稀释裂解液。1500rmp 离心5min后弃上清，如沉淀中还有红色，需再重复一次。此时高活性的单细胞悬液就分离完成了。

队长是我

单细胞悬液这一步做不好可以考虑以下建议

• 处理样本时动作温和，降低细胞裂解和损失，建议采用宽口枪头缓慢吹打单细胞悬液；
  
• 使用细胞筛去除成团细胞及较大的组织碎片；
  
• 可使用密度梯度离心或去除碎片的试剂盒去除碎片；
  
• 利用美天旎去死细胞试剂盒分选活细胞，提高活率。
  

卡卡

把肺组织碾碎 用细胞滤网过滤后制成细胞悬液 上流式检测