基于免疫原理的POCT技术及其原理

临床医师 · 发表于 2013-12-13 07:00

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基于免疫反应原理的POCT测试装置依据流动相的流动方式可粗略地被分为两大类：一类为免疫渗滤技术，利用多孔基质形成反应池，在非均相免疫测试(渗滤)中作为固相；另一类为免疫层析技术，沿着多孔材料(横流)进行分离。用于POCT检测装置抗体的标记物常见的有3类：胶体金标记、彩色乳胶标记、酶标记，其中尤以胶体金免疫标记技术为常用。

(1) 免疫斑点渗滤技术：有特异性待测物抗原（抗体）共价结合在多孔介质表面，通常使用醋酸纤维膜放置在吸水材料上，当样品滴加到膜上后，样品中的待测物质结合到膜上的抗原（抗体）上。洗去膜上的未结合成分后，然后加入被标记的二抗并同已经结合有一抗的分析物一起形成夹心。标记物直接可视(比如彩色乳胶或胶体金颗粒)或通过加入其他的试剂(例如酶底物)来放大可见变化。利用反射仪器阅读产物的颜色变化以达到定量分析的目的。另外，还可以将纯分析物包被于基质的其他区域来建立内控区，其阳性结果表明试剂(还有装置、二抗)的储存和使用没有任何问题。　　

(2) 免疫层析技术：将金标抗体吸附于下端的玻璃纤维纸上，浸入样品后，此金标单抗即被溶解，开始通过毛细作用随样品流动，若样品中含有相应抗原时，即形成 Ab-Ag-Ab-金复合物，当上行至中段醋酸纤维薄膜，即与包被在膜上的抗原（抗体）结合并被固定呈现红色线条（阳性结果）。免疫层析技术与前者的区别在于液体的移动不是通过直向的穿流，而是基于层析作用的横流。

在一塑料片条上依次粘贴如下组份：（1）玻璃纤维膜；（2）聚酯膜，膜上固定着干燥的金标/乳胶抗体；（3）硝酸纤维素膜，膜上包被着线条状的抗体；（4）吸水纸。以上各组份首尾互相衔接，因此在（1）处滴加液体标本，液流即向（4）处移动。当液体到达（2）处时，金标抗体被溶解，同时与标本中的抗原反应而形成复合物。液流继续前移至（3），金标记的复合物再与膜上的抗体结合而呈现红色的线条，多余的金标抗体继续向前流动到质控区域，该区域固定有抗抗体，直接捕捉未结合的二抗。

(3) 胶体金免疫标记技术：氯金酸（HAuCl 4 ）在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。用胶体金标记单克隆抗体与抗原结合，可出现颜色变化，从而显示待测抗原的存在。