微生物检验注意事项（菌落总数、大肠菌群、培养基制备、无菌操作等）

乔帮主

一、微生物实验室注意事项
1、工作室要矮小平整、光滑、无凹凸不平或棱角、四壁及屋顶用不透水之材质，便于擦洗及杀菌。
2、室内采光面积应大，从室外应能看到室内的情况。
3、为保证无菌室的洁净，无菌室周围需设缓冲走廊，走廊旁再设缓冲间，其面积可小于无菌室。
4、无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有日光灯及紫外灯，杀菌紫外灯离工作台以一米为宜，其电源开关应设在室外。
5、无菌室与缓冲间进出口应设推拉门，门与窗平齐，门缝要封紧，两门要错开，以免空气对流造成污染。

二、使用无菌室注意事项
1、无菌室要保持清洁整齐，室内仅存放最必须的检验用品，如：酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、记号铅等。
2、室内检验用具及桌凳应保持固定位置，不随便移动。
3、每2周用2%消毒液（二氧化氯等）水溶液擦拭工作台、门、窗、桌凳及地面，然后用二氧化氯溶液喷雾消毒空气或过氧乙酸熏蒸，最后紫外灯杀菌。
4、定期检查室内空气无菌状态，进行细菌和霉菌的检查。
5、无菌室杀菌前应将所有物品置于操作之部位，然后打开紫外灯杀菌半小时，时间一到，关闭紫外灯待用。
6、操作应严格按照无菌操作规定进行，操作少说话，不喧哗，以保持环境的无菌状态。

三、配制培养基注意事项
1、灭菌时严格按照规定加热、加压，切忌时间过长压力过高，否则会造成营养成分的破坏。
2、切忌使用铜锅、铁锅配制培养基。
3、培养基不能二次高压灭菌。
4、划线用培养基可放入冰箱或培养箱除去水分。

四、无菌操作注意事项
1、进入无菌室之前先进行空气消毒，工作人员进入无菌室以前，必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。
2、动作要轻，尽量减少走动，以免搅动空气。
3、操作要靠近酒精灯火焰区，使用吸管要用吸球。
4、接种环/接种针用前用后进行火焰灭菌。
5、工作结束作好终末消毒，所有培养物均应高压灭菌后再扔掉，以免污染环境。

五、菌落总数测定注意事项
1、选取样品要有代表性，如为固体样品要多采几个部位，液体检样要混匀。
2、每次做样从开始到结束都要进行超净台空气净度的监测，同时对所有灭菌物品做空白对照。
3、为减少稀释倍数的误差，在做连续递增稀释时，每一稀释液应充分振摇使其均匀，同时每一稀释度换一支吸管。
4、在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿壁流入，勿使吸管尖端触及稀释液。
5、倾倒营养琼脂培养基平板时，温度要在46±1℃之间，数量要在15ml左右为宜，不要太多太少。
6、培养物48h培养后培养基失重不超过15%，培养箱内要放水。
7、检样加入平皿后应立即倾注培养基并旋转混匀，一般从稀释到倾注不超过20分钟。
8、平皿内如有链状菌落生长时：菌落之间无明显界限且仅有一条链可视为一个菌落，如为不同来源的几条链则将每条链各做一个菌落记。
9、做菌落记数时平板里所有的菌落都要记数。

六、大肠菌群注意事项
1、对乳糖胆盐管产气的观察只要有气泡往上冒就算产气。
2、在伊红美兰琼脂平板上挑取菌落时一定要选典型菌落。

七、霉菌、酵母菌检验注意事项
1、稀释样品时用无菌水。
2、3天观察时把所有的酵母菌做标记。
3、如果有霉菌被培养出，请不要把皿盖随便打开，待培养物高压灭菌后再清洗。

八、坏包分析注意事项
1、对已开包的酸包胀包要马上转移到无菌瓶中，已防二次污染。
2、根据坏包的不同表现状态适当的选择培养项目。
3、做微生物培养的同时测定感官、理化指标，注意其有何变化。

九、商业无菌注意事项
1、要求有厌氧培养的一定要在厌氧环境下培养。
2、取样测pH值，要与同批正常样相比，看是否有显著差异。
3、对pH 值有可疑的样品都要做涂片染色镜检，与同批正常样相比，看是否有明显的微生物增殖现象。
4、保温期间出现的胀包，漏包、或开包发现PH、感官异常、腐败变质，进一步镜检发现有异常数量细菌的样品均应进行划线培养。


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