【病理干货】组织湿标本处理流程1-组织样本固定

乔帮主

在药物开发过程中，病理技术 (Pathology) 可用于药物早期研发阶段和临床前阶段，而在临床阶段则属于诊断标准，有助于确定癌症标志物的空间分布，通过伴随诊断精准筛选用药人群并评估药物的治疗效果。病理检测过程中，正确的标本固定是制成高质量切片的第一步，而是否能对组织进行标准化处理则体现了病理检测人员的技术水平，对后续病理诊断结果好坏也有很大影响。
什么是组织样本的固定
活体组织一旦停止血液循环和物质代谢，就会因物质代谢障碍产生一系列的生物化学和组织化学的改变。固定是通过让组织中所有细胞和细胞外结构迅速死亡，以避免溶酶体的破坏作用，保持离体组织细胞与存活时形态相似，并防止氧化、腐败，以保存蛋白质与核酸的基本结构。
固定是保存组织器官，用于病理诊断、研究等所必须得步骤。
固定具有渗透、杀死细胞及微生物和固化组织等多方面的作用。
固定是后续所有处理步骤的基础。若组织固定不好，后续的制作过程中无法弥补，对后续诊断会有很直接的不良影响，因此正确的固定，是整个组织处理过程的一个重要环节。
样本固定的一般原则

• 及时固定：固定的组织越新鲜越好，可以更有效的保存组织细胞的形态和抗原性；
  
• 及时修整：对于大标本，剖检时应及时在取材部位附近剖开并且进行相关组织形态固定（如需），以便让目标部位及时被固定；
  
• 固定液：一般使用10%中性福尔马林或4%中性多聚甲醛，特殊的操作流程或染色方法则需要不同的固定液来进行处理；
  
• 固定液量：一般情况下，固定液量应为组织总体积的5-10倍；
  
• 固定时间：一般情况下，固定时间为24-36小时，不宜超过48小时。如未能及时进行脱水步骤，则可转到70%乙醇中暂存；
  
• 固定的温度：一般情况下，组织固定应在室温（19～27°C）下进行，如在2～8°C则应相应延长固定时间；
  
• 如未使用自动化设备，则应不定时搅拌使固定液进行循环。
  

常见固定液介绍

• 10%中性福尔马林：甲醛是一种易挥发且有刺激性气味的液体，商品化甲醛浓度一般在37%～40%，福尔马林则一般使用缓冲液稀释商品化甲醛10X，所以福尔马林通常甲醛浓度为3.7%～4%。用缓冲液调控固定液的PH值为7.0，对后续染色影响相对较小；
  
• 4%多聚甲醛：4%多聚甲醛主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成，pH为7.4。这种固定液适合于绝大多数组织和细胞的固定，是免疫组织化学和培养细胞固定中最常用的固定液之一；
  
• 丙酮：丙酮是一种易挥发的无色液体。丙酮作为固定液，适用于脑组织和冷冻组织。部分石蜡组织如固定不理想，可用丙酮进行二次固定用。丙酮也可替代无水乙醇做脱水机使用，适用于脂类的组织；
  
• AF：由95%乙醇和甲醛配置，常用于皮下组织中肥大细胞的固定。后续可直接用90%乙醇脱水；
  
• AFA：由95%乙醇、甲醛和冰醋酸配置，因添加冰醋酸使得该固定液穿透力强，固定快，常用于快速脱水固定和冷冻切片快速固定。如常规石蜡切片因固定不理想而染色效果不好，可在染色区用AFA固定5min，可改观染色效果。
  

常见固定液的穿透力

为支持靶向药物开发，ACRODiagnostics百斯医学可提供：【病理技术检测服务】、【IHC抗体开发及验证服务】以及【IHC IVD诊断试剂盒全流程开发转化注册服务】。百斯医学病理实验室拥有一站式多功能病理平台，其中包括全套的Leica组织样本制备系统，Leica Bond III以及Dako Linker 48全自动免疫组化染色仪，HistoCore SPECTRA ST染色机，HistoCore SPECTRA CV自动盖片机，Aperio GT 450全载玻片扫描器等设备，病理技术服务团队拥有丰富的检测及免疫组化抗体试剂盒的开发经验，可为医药研发客户提供从制片到染色再到分析的病理检测和抗体试剂盒开发的一站式服务，欢迎咨询！
https://u.wechat.com/MOkSFmXflpMt_OKXMrNXe8Y (二维码自动识别)




原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/683617811