【听听指南怎么说】FISH技术的产前应用指征

John

提到FISH技术，我想很多接触产前诊断和遗传病诊断的人并不陌生，只是它不如染色体核型分析应用得那么广。
下面我会为大家依次介绍FISH技术概况、产前应用指征、局限性、检测前信息知情以及对结果的判断。
重点参考2020年9月发表在中华医学遗传学杂志上的《产前荧光原位杂交技术专家共识》。


相信看完本文，您会从一个拿到FISH结果不知道从何去理解转变成有头绪、有角度且有逻辑的去分析。
话不多说，上干货！！！
一、FISH技术的原理和检测内容
荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization, FISH) 是利用碱基互补的性质，将荧光素标记的探针与组织、细胞核或染色体DNA进行杂交，对细胞中待测核酸进行定性、定位及定量，将染色体复杂和微细的畸变或基因突变清楚显现的细胞遗传学技术。
因其无需细胞培养，分析周期短，灵敏度和特异度均较高，越来越多的被应用到临床诊断中。
FISH技术可以快速检出胎儿常见的染色体非整倍体异常，从而解决染色体核型分析诊断周期长、培养不确定性等问题。
FISH技术还可以分辨一些微小缺失及复杂易位 ，弥补常规以及高分辨染色体显带技术以及人眼分辨力的局限性，提高分辨精度，扩大检测范围。

二、FISH技术的产前应用指征
1、无创产前检测（NIPT）提示的13 、18、21和性染色体数目异常、需要进一步明确诊断者；染色体异常嵌合的诊断，对嵌合比例做出较为准确的判断。
2、FISH技术与经典细胞遗传学技术（染色体核型分析）的联合应用，对所有具备侵人性细胞遗传学产前诊断指征的胎儿进行检测（参照细胞遗传学产前诊断指征），有助于尽早获得胎儿常见染色体数目的信息。
3、对于孕周过大、染色体核型分析细胞培养失败或其他原因不能行细胞遗传学产前诊断者，FISH技术可作为补救诊断手段之一，能提供常见染色体非整倍体异常的检测。
4、FISH技术与其他分子遗传学诊断技术联合应用时，可同时采用FISH获得13、18、21、X、Y 等染色体数目的信息。包括在进行单基因遗传病分子诊断时，同时进行FISH检测有助于排除常见染色体数目异常的情况；在其他分子遗传学诊断技术（如QFPCR、BOBs等）诊断结果不明确时，可采用FISH技术进行验证。

三、FISH技术的产前应用局限性
1、产前FISH通常仅对胎儿常见的13 、18、21 、X、Y 染色体的非整倍体进行检测，而未涵盖其他的染色体数目异常；
2、与全基因组高通量测序相比，FISH仅能检测染色体上非常有限的已知位置，并不能检测未知变化；
3、在非特殊情况下，未对染色体结构异常进行检测。鉴于其技术的局限性，FISH不能完全替代传统的染色体核型分析。

四、检测前应知情的几点信息
1、FISH能够检出胎儿常见的13、18、21、X 、Y 染色体非整倍体异常，而不能诊断其他染色体数目异常及染色体结构异常；
2、FISH不能检出单基因或多基因遗传病，或其他原因（包括药物）导致的胎儿畸形或异常；
3、FISH检测结果正常，胎儿仍有可能因其他因素导致出生缺陷或智力发育不全；
4、由于现有医学技术的局限性，FISH检测不可能做到完全准确，某些嵌合体异常可能难以检出；细胞过少、母体污染等因素可能导致无法得出结果或使结果不准确等。
5、FISH检测结果异常的咨询：告知受检孕妇及其亲属FISH检测结果异常的临床意义、胎儿的预后及风险以及再次发生的可能及风险等。

【重点来了】五、对于FISH检测结果的判读
1、每份FISH结果由两位阅片人独立阅片；选择各通道信号均清晰可辨、信号强度均一、信号边缘圆润、背景干净、单一无重叠的细胞进行计数。红色信号表示21号染色体，绿色信号表示13号染色体。染色体数目正常的细胞显示2个红色荧光点及2个绿色荧光点，另一张玻片的红色信号表示X 染色体，绿色信号表示Y 染色体，蓝色信号表示18号染色体，偶可见极微弱的散在荧光杂点，但不影响结果判断；杂交失败的细胞形态正常，包膜完整清晰，但背景常较明亮，伴有胞核内散在的荧光信号，导致无法辨识或者难以确认。
2、每组探针随机计数50个细胞；如发现1个以上信号异常的细胞，则建议扩大计数至100个细胞，遇到染色体嵌合体时，可扩大至50~500 个细胞，精确计算染色体的嵌合比例。
3、单独判断每种指标，正常细胞的比例>90%，异常细胞的比例<10% ，提示该指标未见异常。
4、某种指标异常细胞的比例>10% , 提示该指标异常（异常细胞的比例介于10%~60%之间者提示为嵌合，扩大计数到100个细胞）。

【总结】荧光原位杂交作为一种借助非放射性荧光信号对样本进行检测的技术，无需细胞培养，分析周期短，能够快速诊断13、18、21、X 、Y 等染色体的非整倍性异常，有助于解决以核型分析为主的产前诊断服务能力不足、诊断周期长等问题。

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