蛋白分析有高招——RIPK1真重要

幸福侠侣

受体相互作用蛋白激酶RIPK1
受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）是由死亡受体家族和模式识别受体激活的多种信号通路的重要介体。RIPK1包含一个N端激酶域，一个C端死亡域（DD）和一个包含RIP同型相互作用基序（RHIM）的中间域。在TNFα刺激的细胞中，RIPK1激酶通过激活依赖RIPK1的凋亡和细胞焦亡来执行促细胞死亡和促炎活性。


由此产生的复合体触发多种细胞反应，包括细胞因子释放、小胶质细胞激活和坏死下垂(一种细胞死亡的调节形式)，RIPK1在这一信号级联中的早期作用导致了一种假设，即抑制RIPK1信号可能对以过度细胞死亡和炎症为特征的疾病有益。事实上，抑制RIPK1活性已被证明具有保护作用。



越来越多的研究表明，开发靶向RIPK1的高活性、高选择性抑制剂能够为炎症性疾病、神经系统疾病、肿瘤、脓毒血症等的治疗提供新途径。

p-RIPK1检测方法
作为一个重要靶点，近些年针对RIPK1抑制剂的研究也越来越受到关注。但在不久前市面上还未能有商品化的测定磷酸化RIPK1的试剂盒，研发人员要测定磷酸化RIPK1多是基于不同的分析技术，开发各自方法。
为了更高效的进行磷酸化RIPK1的测定，PerkinElmer推出了成品化 p-RIPK1 (Ser166)试剂盒，这是基于Alpha技术的一种均相免疫检测方法，试剂盒买来即用，实验过程无需洗涤，使用带Alpha模块的酶标仪即可快速读板。


技术优势
· 灵敏度高，线性范围宽
· 样本需求量少，可以兼容细胞培养上清，细胞裂解液，血清，血浆等样品
· 操作简单，无需包被和洗板
实验原理
包被有链霉亲和素的供体微珠可以捕获生物素化的抗体，受体微珠包被有专有的CaptSure试剂，可以结合带有CaptSure标签的抗体。
在靶蛋白p-RIPK1 (Ser166)存在的情况下，这两种抗体使供体和受体微珠紧密结合，在680nm激光照射下，供体微珠上的光敏剂将周围环境中的氧气转化为更为活跃的单体氧。
单体氧扩散至受体微珠，产生一系列的化学发光反应，最后将能量传递到铕，发射波长为615nm，发光信号与样品中存在的p-RIPK1 (Ser166)含量成正比。
实验步骤及结果
1. 先将受体微珠加入到细胞裂解液中，
2. 孵育1-2小时，再将供体微珠加入混合液中，
3. 孵育1-2小时，即可读板




实验配套设备
整个实验无需洗涤， 只需一台兼容ALpha技术的读板仪即可轻松完成~ 小优推荐PerkinElmer配套的VICTOR Nivo™多功能酶标仪


含Alpha等六种检测模式
VICTOR Nivo™多功能微孔板检测仪是最新一代的紧凑型、轻量级、现代感与一体的桌面式读板仪。无论是实验台、生物安全柜还是孵育箱都适用，并且可在各工作区间轻松转移

除了Elisa OD值检测，lumi检测，荧光强度等基础功能，VICTOR Nivo™配置专用激光光源Alpha模块，仅需数分钟即可完成96和384孔板检测，同时还能够保持很高的信噪比，实现快速、高灵敏度的Alpha检测

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