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[分享] 针对同时检测细菌,病毒和原生动物性传播疾病的病原体的STI多重阵列的评价

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发表于 2013-12-12 08:30 | 显示全部楼层 |阅读模式

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MG Pulvirenti1, J McKenna2, C McErlean1, NF McGrath1, C Deane1,

                                                          C Cox2, MA Crockard1, JV Lamont1, SP Fitzgerald1, PV Coyle2

                                                           1.英国朗道实验诊断有限公司 2.皇家维多利亚医院病毒实验室


       性传播疾病(STI)呈现了一个重大的公共健康问题,每年全球出现4.99亿可治愈的性传播感染(梅毒,淋病,衣原体和滴虫)新病例1。大多数性传播疾病可以成功被治疗,但是很多病例都是没表现出症状2,因此会导致感染的进一步传播。未经治疗的性传播疾病会对生殖,孕产妇和新生儿的健康产生严重的影响3,其他病原体如艾滋病毒4,5的传染会增加致病风险,可能导致长期功能性损伤。性传播疾病虽然由不同的病原体造成,但是有些病原体显示相似或重叠的症状,从而不能确诊是否存在多重感染可能性。据报道,多达35%性病病例报告中显示存在不止一种的性病6。

       在这种情况下,用来检测这些性病传染的更有效的方法已变得越来越重要。现在大多数市售的STI测试是单式或复式分析,然而多重分析可以检测到多重感染从而提高了病人诊断结果准确度。除此之外多重分析还能改善合理使用抗生素,从而降低抗生素耐药性的潜在风险。

       这项研究检测评估是在创新型的多重PCR技术的基础上,加上生物芯片阵列技术,能从一个单一的尿液样品或棉签样本同时检测出10种性病病原体,包括细菌(梅毒螺旋体,沙眼衣原体,淋球菌,支原体,人型支原体,解脲支原体,杜克雷嗜血杆菌),病毒(单纯疱疹病毒1和2)和原生动物(阴道毛滴虫)。这种方法提高了检测能力和诊断结果的准确度,进一步减少由性传播疾病所带来的经济负担。

材料与方法

       从尿液及泌尿生殖道棉签取样样本组(n=300)提取的DNA ,获得从一个区域病毒实验室(RVL)盲样,用Randox Evidence Investigator 分析仪((Randox Laboratories Limited,Crumlin,UK)的STI复合型阵列可以检测沙眼衣原体(CT),淋球菌(NG),单纯疱疹病毒1和单纯疱疹病毒2(HSV1,HSV2),梅毒螺旋体,阴道毛滴虫(TV),杜克雷嗜血杆菌(HD),生殖支原体(MG),肺炎支原体,人型支原体(MH)及解脲脲原体(UU)。

       DNA的提取可使用Qiagen Symphony(Qiagen,Crawley,UK)和Abbott m2000sp系统(Abbott,Maidenhead,UK)按照生产商的说明进行操作。

       采用多重PCR技术,将所有特定的高敏度的引物集中在一个反应里。每个样品中放大的特定病原体序列是分布在一个的生物芯片上,然后使用生物芯片阵列技术(BAT)进行检测。这个过程涉及在离散试验区(DTRS)的杂交,共轭和化学发光检测。然后使用Evidence Investigator 分析仪分析仪和专用检测软件对该生物芯片进行检测 (如图1)。结果报告会得出每个病原体呈阳性或阴性。为确保结果的可靠性,每个步骤都有内部检测控制。

测验结果

       通过比较单式TaqMan实时定量PCR法与RVL(表1),可以确定常规的STI的临床测试的灵敏度和特异性。在300例临床样本里,有203例检测出为阳性,其中20%感染至少两种及以上性病(16%感染2种,4%感染3种,0.5%感染4种)。研究发现1/3的HSV-1检测,1/4的淋病检测,1/5的衣原体检测都会检测出2种及以上的性病,如果用常规的单病原体检测方法,这些就不能被检出(表2)。

       最普遍的多重感染是CT+MH (10/203,5%),HSV1+UU (9/203,4.5%),MH+UU (8/203,4%)and CT+UU (6/203,3%)。CT+NG占2%(4/203)。所有MH呈阳性的病例都是多重感染(表2)。

结 论

       Randox STI 多重阵列检测可以从一个的尿液或棉签样本同时检测出细菌,病毒和原生动物病原体,能够确诊多重感染,而现常规的医疗实验往往会漏诊或不能确诊这些多重感染。它能使治疗更有效且有针对性,减少滥用抗生素,从而减少产生病原体的抗药性。

       经临床验证,Randox STI多重阵列检测为这10种STI提供持续的高敏感性和高特异性的检测结果从而证明这种检测方法是健全的、敏感度高、特异性高。由于该检测方法操作简单,可以在一般的标准病理实验室或者医院实验室,采取常规的取样方式,使用PCR设备结合Evidence Investigator 分析仪进行检测。

参考文献

1. World Health Organisation Fact sheet N°110 August 2013.
2. Centers for Disease Control and Prevention. CDC Grand Rounds: Chlamydia prevention: challenges and strategies for reducing disease burden and sequelae.MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2011, 60(12):370-373.
3. Singh, S, Darroch JE, Ashford LS,Vlassoff M. Adding it up: the costs and benefits of investing in family planning and maternal and newborn health. Guttmacher Institute and United NationsPopulation Fund, 2009.
4. Fleming, DT, Wasserheit JN. From epidemiological synergy to public health policy and practice: the contribution of other sexually transmitted diseases to sexual transmission of HIV infection. Sex. Transm. Infect. 1999, 75(1): 3-17.
5. Nusbaum, MR, Wallace RR, Slatt LM, Kondrad EC. Sexually transmitted infections and increased risk of coinfection with human immunodeficiency virus. J. Am. Osteopath. Assoc. 2004 104(12): 527-535.
6. Choudhry S, Ramachandran VG, Das S,Bhattacharya SN, Mogha NS. Pattern of sexually transmitted infections and performance of syndromic management against etiological diagnosis in patientsattending the sexually transmitted infection clinic of a tertiary carehospital. Indian J. Sex. Transm. Dis.2010, 31(2): 104-108.

                                                                                                                Randox 供稿


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