国内有什么靠谱的elisa试剂盒吗？

青草

本人物理背景无奈做起了生物实验，最近用了国产ELISA试剂盒，用了好多都没结果。一直怀疑是自己的问题。前几天有为生物的学姐告诉我国产试剂盒不可靠。。。实在无语

原文地址：https://www.zhihu.com/question/270322482

同花顺

利益相关：自卖自夸不打硬广，我司从事生物学试剂相关的研发工作，至今清华大学，复旦大学，以及北京大学跟我司都有过深度的合作也至今是我司的客户，言归正传，
先简单的科普一下
ELISA试剂盒的本质和用途。Elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒lgM抗体ELISA检测。


但是回归到问题要点:
因为ELISA试剂的问世来自于上个世纪六十年代至今已经六十年了，其技术已经很成熟了，进口的和国产的区别都一样的，可能是题主买了不知名的智商产品。跟进口国产无关，购买ELISA试剂盒应该考虑的十种因素购买前要问题清楚就可以了供科研朋友们参考。
1基于研究物种选择
2基于分析目的选择
3 基于检测样本选择
4 基于检测范围选择
5 基于样本量选择
6 基于文献引用选择
7 基于售前售后服务选择
8 基于美誉度选择
9 基于成本预算选择
10 基于关键技术参数选择

卡卡

Elisa试剂盒好不好用，还是得用事实说话：能做出来实验，能发文章，就是好用的试剂盒。如果实验做不出来，文章发不了，再怎么吹嘘，都是垃圾。
那怎么找到靠谱的Elisa试剂盒呢？
提供一个思路：越多的生物人用过，用这个Elisa试剂盒发过越多的文章，那不就说明越“靠谱”吗？
怎么看这个试剂盒发过多少文章呢？给大家分享一个方法：
一、登录DeepBio官网
https://www.deepbiogroup.com（或者搜索引擎直接搜“DeepBio”，选择"AI-Driven BioMed R&D Solution"就好了）。
选择产品推荐评分系统，输入你想查找的Elisa试剂盒的名称，比如“IL2”,产品种类选择“免疫检测”。


二、查看各个品牌的Elisa试剂盒的信息



要是对品牌有要求，左侧可以进行筛选

三、查看有多少文章使用过这些试剂盒
点击基于文献引用量和影响因子的DeepBio得分，就可以查看文献引用情况。


做实验的都知道，被66篇文章使用过的Elisa试剂盒肯定比没有文章使用过的试剂盒靠谱。毕竟别人都等于给你做好了产品测评的工作。
这个网站功能不错吧。篇幅有限，只能简单介绍，有兴趣的可以直接去官网使用，反正现在都是免费，不用白不用：https://www.deepbiogroup.com（用电脑浏览体验更佳）
希望大家都能发CNS吧，最差也来个子刊，加油！

长长的路

生物制药占全球药品销售额的很大一部分，2019年全球十大药物重磅炸弹中有八个是重组生物制药。为确保高水平的临床试验期间的患者安全和药品放行，不同的监管机构制定了许多法规，例如FDA和EMA。药品的市场准入上市申请需要对潜在风险和收益、关键质量属性 (CQA) 进行深入的全面评估，这些属性包含在通用技术文件 (CTD) 中。其中，宿主细胞蛋白 (HCP) 就是这样一种 CQA。它们形成具有不同理化和免疫特性的蛋白质的复杂混合物，并且是在生物制品制造过程中由生产细胞系释放。
复杂细胞生产系统的 HCP 形成受多种生物和非生物因素的影响，很难预测单个制造过程的 HCP 表现模式。因此 HCP 被定义为与工艺相关的药物杂质，会对生物药物产品的质量、安全性和功效产生负面影响，对患者具有潜在风险，因为它们可能在人体内表现出免疫原性或其他不希望的活性。在纯化过程中，必须有效降低HCPs，以确保去除最终原料药中不需要的HCP蛋白质。
EMA 和 FDA 这两个主要监管机构发布了一套指导方针，以监管生产过程中对 HCP 的控制。这些指南的要点是：
•  建议采用高度敏感的方法
•  需要定期检测残留 HCP
•  要求最终原料药中 HCP 残留允许量为 (<1-100 ppm)
特别是 ICH 指南 Q6B、Q8(R2)、和 Q11 定义了此类杂质，并明确了在逐步下游加工过程 (DSP) 中精确监测和减少 HCP 的需求，一直到很低的含量。尽管没有指定精确值，但普遍的共识是将最终原料药中的 HCP 负担降低到100 ppm 以下和 10 ng/剂以下。
准确检测后续 DSP 样品直至最终原料药中的 HCP 杂质在很大程度上取决于建立可靠且稳健的 HCP 测量方法。为了克服对于 HCP 定量的个别方法的内在局限性，建议使用多方面的 HCP 分析方法。目前，有一系列方法可用于监测药物生产过程中HCP的下降。但因酶联免疫吸附试验 (ELISA) 方法具有高速、高灵敏度和高通量相结合的优点，且无需高成本的仪器，因此仍然被认为是 HCP 检测的金标准。
对 HCP 监控的需求和 HCP ELISA 的选择思考
监管机构已就使用不同的宿主细胞蛋白酶联免疫吸附测定 (HCP ELISA) 形式检测 HCP提出了一致的建议。根据生物制品的开发阶段，用于 HCP 定量的 HCP ELISA 可分为三种主要形式（如下图）：
1）通用型 HCP ELISA 试剂盒，也即商业化的 HCP 试剂盒；
2）工艺平台（或多产品）型 HCP ELISA，也即根据具体工艺流程/平台定制的 ELISA方法和配套的试剂；
3）工艺特定型 HCP ELISA，以及单独为某一种药物特定的工艺开发的 ELISA 方法和配套的试剂。



用于 HCP 定量的三种 ELISA 方法

HCP ELISA 的适用性通常由性能标准决定，例如：即使在高度纯化的样品中也能检测 HCP 痕量的检测方法的灵敏度，以证明下游工艺过程 (DSP) 中的 HCP 对数降低、严格的稀释线性和足够的 HCP 抗原特异性抗体覆盖率。虽然商业化的通用型 HCP ELISA 使用广泛活性的抗体覆盖方法，但该方法仅针对重组蛋白生产的选定细胞系种类，后两种 HCP ELISA 形式基于对特定生物制药的制造和加工提供更高的特异性。
对于在候选药物开发的不同阶段最好使用哪种 HCP ELISA 方法，这并无法给出一个很明确的答案。如图所示，在临床试验的 I 期和 II 期期间仍可能发生 DSP 开发的变化。后者的完成（II期）则需要为高度稳健性的工艺定义工艺参数规范。相比之下，用于临床 III 期试验的原料药必须满足与上市后连续生产药物相同的要求。对于这一阶段（III期）的药物生产，所有过程都需要进行验证，包括分析方法的使用。如果在此阶段（III期）对生产过程进行更改，则必须重复工艺验证，直到达到足够的一致性。这包括监测残留的 HCP 杂质，当在生产或 DSP 过程中引入变化时，这些杂质的数量和成分在技术上会有所不同。
因此，最常见的建议是在方法开发过程中仅依赖广泛有效的通用型 HCP ELISA 试剂盒（II期前）。在向 II 期和 III 期扩展临床试验申请前进时，工艺特定的 HCP ELISA 的实施通常证明足以用于 HCP 监测，从而满足测定验证的标准。在生产和 DSP 条件以及不同生物制品药物的主要性质差异很小，没有对相应的 HCP 表现模式产生很大影响的情况下，使用平台（多产品）型 HCP ELISA 就足够了。



不同阶段使用的不同HCP检测策略

综上所述，平台型或工艺特定的 HCP 检测让您高枕无忧。然而，由于药物失败的高风险，此类检测仅在开发的后期阶段才值得投资。本篇接下来将重点介绍商业化通用型CHO HCP ELISA试剂盒，近期将另撰写文章介绍定制化的平台型或工艺特异型的 HCP ELISA 开发策略。
如何选择最合适的HCP ELISA检测试剂盒？
从理论上讲，通用型HCP ELISA试剂盒应适用于特定细胞系的所有HCP测定，不受细胞系改造、发酵条件和纯化工艺设计的影响。但在大多数情况下，根据细胞系、培养基和工艺参数的不同，HCP的污染物可能会有很大差异。 HCP 试剂盒对所有 HCP 的识别程度将取决于其配套的抗体与实际 样本中HCP 组成的匹配程度，以及针对不同HCP的抗体丰度和对相应的 HCP 的亲和力。因此，各种商业化通用型 HCP ELISA 在检测相似类型和水平的 HCPs 的能力方面可能存在很大差异。并非所有的商业化通用型HCP ELISA试剂盒能在每个项目中均显示出所需的特异性和敏感性。
解决方案--增强的通用型HCP ELISA试剂盒组合套装
德国有名的生物技术公司 BioGenes 已经开发出一种增强的通用 CHO 360-HCP 分析方法，明显优于当前的其他商业化通用型 HCP ELISA 试剂盒。
自1999年以来，BioGenes 已开发出多种 HCP ELISA 试剂盒和方法，包括通用型，平台型和工艺特异型。在使用不同细胞系完成了150多个项目后，BioGenes 已在 HCP 残留检测领域打下了深厚的基础，积累了宝贵的定制开发与协助申报的能力。在经验丰富的科学家和积极主动的项目管理团队的支持下，BioGenes 具备提供多方位服务的能力，受到全球客户的赞赏。
Biogenes 目前的通用型 HCP ELISA 产品主要包括针对 CHO 和 E.coli 宿主开发的试剂盒。以下以 CHO 相关产品举例。
1、CHO|360-HCP ELISA 的抗体和检测方法开发
多克隆 HCP 抗血清是通过用等量的源自模拟转染和发酵的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞系的CHO K1 和 CHO S 细胞的 HCP 对兔子和山羊进行免疫而产生的。使用不同制备的抗原：1）总 HCP ，或2）分子量分级 HCP（下表），每个HCP级分（低分子量、中分子量和高分子量）单独用于免疫，在纯化前汇集不同 HCP 级分的抗血清，通过使用针对总 HCP 的优化纯化策略获得单特异性多克隆抗体。这产生了一组四种不同的 HCP ELISA试剂盒（A ~ D型），它们共同构建了增强型通用 CHO|360-HCPELISA 试剂盒组合套装。


2、检测特异性
通过 CHO-HCP 标准品的二维 (2D) 凝胶电泳和相应的 A~D 型试剂盒的抗体进行免疫印迹，确定了所有四种测定对抗原的高特异性（图 1）。作为参考，将 HCP 的 2D凝胶电泳蛋白质图谱转移到硝酸纤维素膜上并用胶体金染色（图 2）



图1：显示 Biogene CHO 360-HCP 的抗体特异性，分别使用 A~D 型试剂盒抗体对经过2D 凝胶电泳的 CHO-HCP 标准品进行免疫印迹杂交



图2：显示了 CHO-HCP 的总蛋白分布。a）CHO-HCP 标准品在 2D 凝胶电泳后的考马斯染色；b）凝胶电泳印迹到硝酸纤维素膜后的胶体金染色

3、灵敏度
通过对 CHO-HCP 抗原进行考马斯染色，并用相应抗体进行 2D Western 印迹，确定了在所有四种检测中对抗原的高度特异性。对于所有四种试剂盒，检测下限（LOD）在0.5~1.0 ng/mL之间，定量下限（LOQ）为 2~3 ng/mL，工作范围 2~100 ng/mL。
4、回收率
CHO 360-HCP 试验旨在覆盖广泛的抗原，CHO|360-HCP ELISA 已在大量模拟 CHO-HCP 样本的基础上进行了广泛测试。所有样品均来自对应于某些生物制品生产过程的 CHO 细胞的模拟发酵。对于每个 HCP 样品，蛋白总量首先由 Bradford 确定。此外，每个样品都使用五种不同的 CHO-HCP 测定法进行分析：BioGenes 通用 CHO|360-HCP ELISA 类型 A ~D 和常用的一款商业化通用 CHO-HCP 测定法。
如下图，在样品 4 (x) 的情况下，使用类型 D回收率为测定估计为>90%。使用类型 A~C试剂盒的回收率要低得多，而使用那款商业化试剂盒测定的回收率仅为 20%。在大多数情况下（>65%），可用我们的四种通用 CHO|360-HCP ELISA（A ~ D 型）中的一种估计最佳的回收率。



不同HCP ELISA试剂盒在不同样品中的回收率表现

产品特色和优点
Biogenes的通用型 360-HCP ELISA试剂盒提供了A~D型四种选择（每种试剂盒使用不同的抗体组）。Starter Set入门套装（A~D型试剂盒各一套）可以快速轻松地选择最合适的其中一种。另外，使用360-HCP ELISA 检测试剂盒的优势如下所述：
• 更少的非特异性结合： 360-HCP ELISA 试剂盒使用链霉亲和素-POD 偶联物用于检测生物素标记的抗体，以获得可重复的结果、更少的非特异性结合和更低的背景噪音
• 即使用最高稀释度的标准品也能得到准确的结果：360-HCP ELISA 试剂盒提供未稀释的标准品以获得更高的产品稳定性、更准确的结果以及设置稀释范围的更大灵活性
• 自动洗板：可在自动洗板机和高通量系统中使用 360-HCP ELISA 试剂盒，建议在孵育期间振荡混匀
总结
根据Biogenes的数据和长期经验得出结论，没有一种通用的HCP检测方法适用于所有样本。 然而，在Biogenes的CHO 360-HCP分析中，通过A~D型四种不同试剂盒的组合，以及伴随的 2D 分析测试各个过程的模拟 CHO-HCP 以及多个过程控制样品（ICP）来确定，这种前期可行性测试可大大提高大多数样品的回收率。
为了选择性能最佳的试剂盒类型，使用 Starter Set 入门试剂盒套装对3~5个过程中样品在八个稀释度（2倍梯度稀释系列）和重复孔中进行分析。
下图显示了选择最佳检测试剂盒的一般流程。
首先，选择产生最高 HCP 信号的试剂盒类型。
其次，在下游纯化过程中，测得的HCP 水平应随着工艺进程明显降低。如果它们保持不变或仅略有下降，则可能是抗体与重组产物（DS药物）的交叉反应。在这种情况下，建议进行额外的测试，例如 1D 或 2D 免疫印迹。
最后，选择具有可接受的稀释线性的试剂盒类型，样品的不同稀释度应该存在稀释线性。
我们建议选择显示最高 HCP 值和可接受的稀释线性的试剂盒类型。如果试剂盒类型显示最高 HCP 值但没有或呈现不可接受的稀释线性，建议选择显示最佳稀释线性但 HCP 值较低的试剂盒类型。
如果四种试剂盒类型均不符合选择标准，则可能建议开发平台型或特定工艺过程的 HCP 检测 ELISA 方法。其他分析，例如使用 Mock HCP 和选定的抗 HCP 抗体进行的 2D 免疫印迹以及加标实验，可以帮助进一步评估 ELISA 方法的准确性。



选择最佳 CHO 360-HCP ELISA 试剂盒类型的一般流程

长长的路

酶联免疫吸附分析Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA是以体外抗原抗体反应为基础，将抗原抗体特异性反应与酶的高效催化作用相结合的一种检测方法，灵敏度可达皮克(pg/mL)水平。它是目前商业应用最为成熟的免疫分析方法之一，在医学实验、临床诊断、生物制药方面的运用也极为广泛。目前，常见的ELISA类型有四种：双抗夹心法、直接法、间接法和竞争法。
其中，双抗夹心法是最为常用的一种，分双抗体夹心和双抗原夹心。下面小科将以双抗体夹心法为例，和大家分享相关知识~

实 验 原 理

双抗体夹心法，其基本原理是将定量的包被抗体以物理吸附的方法固定于微孔板表面，然后加入待检标本，通过加入检测抗体，酶标记第二抗体后用TMB底物显色，微孔板中颜色的深浅与待测物的浓度呈正相关。

1 包被抗体
许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等，在进行抗体固定化之前，需要对酶标板材进行筛选。酶标板由亲水到疏水，对蛋白的结合会由强变弱，造成吸附能力的差异。将抗体吸附在固相载体表面时，要求纯度要好，吸附时一般要求pH在9.0～9.6之间。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：用不同的蛋白质浓度包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本OD值，选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。

2 标准品及样本
标准品即为目标物（样本中待检测因子）的纯蛋白，从母液稀释到级联稀释都需要特别留意，标曲的制作是ELISA实验成功的关键。待检目标物需具备多个抗原表位，即二价或二价以上的大分子抗原，因为这种检测方法需要两种抗体。另外，需要注意的是血清样本中的类风湿因子（RF）干扰——RF能与多种动物的变性IgG的Fc部分结合而产生假阳性反应。

3 洗涤液
ELISA操作中会涉及到多次洗板。长时间的孵育后，会出现非特异性结合，这时就需要洗涤液来洗去非特异性结合的蛋白或抗体，通常为PBS，洗4-6次，每次30s左右。多次短时间洗板比少次长时间洗板更有效，在最后一次洗板时，尽量拍净液体，同时注意让板子保持湿润。

4 检测抗体
双抗体夹心法中的检测抗体与目标蛋白结合位点需要有别于目标物与包被抗体结合的位点，即会涉及抗体配对的问题。常用的抗体配对方法有下几种：
● 包被抗体为单抗，检测抗体为多抗；
● 包被抗体为单抗，检测抗体为单抗，但这两种单抗针对的抗原表位不同；
● 包被抗体为多抗，检测抗体为多抗，这两种多抗一般来源于不同的宿主。

5 生物素标记的二抗
鉴于酶标二抗的局限性，现在厂家一般引入生物素亲和素系统(biotin avidin system, BAS)，这种系统在提高反应灵敏度的同时，应用起来也更加方便。进行生物素标记时，可依据抗体所带可标记基团种类（氨基、醛基、巯基等）以及分子酸碱性选择相应的活化生物素和反应条件。生物素标记后，不影响被标记物的生物活性。

6 辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素
每个亲和素分子可与4个生物素分子结合，所以可以偶合更多连接生物素的酶分子，从而大大提高了ELISA实验的灵敏度。生物素和亲和素间的亲和力强，二者一旦结合，就极为稳定，而且这种结合反应时间比抗原抗体反应所需时间短。在BAS检测中多用链霉亲和素“streptavidin, SA”，它是链霉菌培养过程中的分泌物，由4条相同的肽链组成。HRP灵敏，稳定，比活性高，分子量小，纯酶容易制备。其有4对半胱氨酸形成的二硫键，99位Asp和123位Arg形成的盐桥，9个潜在的糖基化位点，有两个金属中心，可催化显色底物TMB产生蓝色一价物。

7 显色底物
由于 TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）比其他显色底物具有更高的灵敏度且无致癌性、故而被广泛使用。HRP 或其他适当过氧化物酶能在过氧化氢存在下催化TMB生成可溶的蓝色物，此时通常可在 370nm 测定吸光度。当显色反应被酸性溶液终止后，产物由蓝色一价物转为黄色二价物，此时可在 450nm 测定吸光度。






实 验 步 骤 概 要

1） 准备好所有的试剂和梯度稀释的标准品。板条加入300μl 1×洗液静置浸泡30秒。
2） 标准品孔加入100μl 2倍倍比稀释的标准品。血清/血浆：空白孔加入100μl标准品稀释液; 细胞培养上清: 空白孔加入100 μl培养基。
3) 血清/血浆：样本孔加入50μl 1×检测缓冲液和50μl 样本 细胞培养上清：样本孔加入100μl细胞培养上清。
4) 每孔加入50μl 1:100稀释的检测抗体。步骤2、3、4 在15分钟内完成。
5) 封膜，室温孵育2小时。洗涤6次。
6) 每孔加入100μl 1:100稀释的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素。
7) 封膜，室温孵育45分钟。洗涤6次。
8) 每孔加入100μl显色底物，避光，室温孵育5 - 30分钟。
9) 每孔加入100μl终止液。
10) 30分钟内，在450nm波长检测OD值，参考波长570nm或63nm
注：以上步骤是以联科生物ELISA试剂盒为参考，不同厂家的试剂盒操作步骤可能不一样，开始实验前一定要仔细阅读产品说明书哦~

彩 蛋

任何事物都不是完美的，ELISA方法看上去很完善，在实际应用上也不可避免得存在些问题。首先，酶标板与抗体之间不是化学连接，而是通过范德华力，静电引力，疏水作用和π-π堆积的方式将抗体吸附在其表面。故酶标板无法牢固地将抗体包被在其表面。经历后续孵育，洗板过程，难免会将已经吸附上的抗体洗掉，增加了实验操作的不确定性。其次，包被抗体和抗原之间，检测抗体和包被抗体之间存在的识别作用也比较复杂。抗体抗原之间不是一对一识别，而是一个抗原可以连接多个抗体，一个抗体理论上也可以连接多个抗原。目标物和检测抗体中间经过了两次识别过程，这使得二者的识别对应关系变得更为复杂。这种情况下，检测信号和待测样浓度也不是一对一关系了。商业检测试剂盒中采用96孔板的方式就是为了通过多次实验消除一些误差。但是相对于常规免疫实验而言，ELISA具有明显优势，可谓蛋白定量的“金标准”。

卡卡

都9012年了童鞋，
国产的ELISA也有出口到国外的，
所谓进口的也有从国内出去贴个牌的，
你可以选国产的但是有出口到国外的牌子，最好是出口到欧洲和日本的，那边的人普遍比较挑，质量应该可靠。