解忧小工具｜手把手教你用Image J进行免疫荧光分析（系列一：荧光细胞计数）

Rose

前面我们讲了免疫组化如何通过Image J软件进行分析，也讲了免疫组化的进阶技能：免疫荧光。目前也会有很多同学好奇，做了免疫荧光，用Image J软件能进行分析吗？能进行哪些分析点的处理呢？
跟着小编的节奏，我们看一下免疫荧光如何通过用Image J分析计算视野内细胞数量。
1.在Image J软件打开我们要分析的免疫荧光图片；
2.对图片进行颜色通道拆分：Image→Color→Split channels;


3.选中要分析的通道图片（计算细胞总数一般是计算细胞核通道，所以我们常规选择blue通道），将图片转为8 bit;


4.调阈值，去除背景，选中细胞：Image→Adjust→Threshold  调整比例后选择Apply;




5.填充细胞空隙：Process→Binary→Fill holes;


6.打断细胞重叠的部分:Process→Binary→Watershed;


7.圈选测定细胞大小，Analyze→Tools→ROI Manager;
（因为染色及成像过程中会出现一些杂质等情况，这个时候需要我们对自己项目的细胞有个预判值，我们需要通过ROI圈定一个视野内相对较小的细胞，其面积作为后续计算细胞判定的阈值。）


用圆形工具圈定较小的细胞，点击Add→Measure，测定细胞面积;




8.自动分析，计数：Analyse→Analyze particles;
（因为我们用画圈工具进行ROI圈定细胞，可能存在面积偏大的情况，所以我们设定的size可以比我们ROI圈定的细胞面积稍小一点）






这个Count值就是该视野内细胞数量了，但是要注意这个数量计算是相对的，不是完全精准的哦。
今天的免疫荧光细胞计数教程就到这里了，后续我也会继续讲解其他免疫荧光图片通过Image J软件将图片转化为数据的教程。

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