别让你的Western Blot图片拖了你的后腿

检验之星

在这个“照骗”比照片多的时代，热衷于处理图片的可不仅仅是爱美的女生，还有一批虽然实验结果不如意仍然想要发论文的科研人员。但科学研究岂容弄虚作假，为此各大期刊对于实验数据图像的要求越来越严格，不少论文就是因为Western Blot图片不符合要求导致论文被拒，有些甚至连重新提交的机会都没有。那到底什么样的图片才是合格的呢？
   让我们先看看大名鼎鼎的《Nature》是怎么规定的。



从图上我们可以看出，《Nature》允许对图片进行裁剪，但是剪切必须要在图注中进行说明，同时《Nature》也提到了一些期刊要求必须在文章增补信息中提供完整的blots图片。裁剪后的Blots图像必须有一定的宽度“上下各6个条带的宽度”（不要过窄，以掩盖一些必要信息）。高对比度的blots图片是不允许的，因为这会掩盖一些附加条带信息。投稿者应尽量曝光出带有灰色背景的图片，若高对比度blots不可避免，也应在增补信息中提供多次曝光的图片（以说明没有掩盖其他信息）。
   如果只是《Nature》一家这么要求，大不了转投其他同样级别的期刊好了，你也许会有这种想法，那让我们看看其他知名期刊是怎么规定的。



（Journal of Cell Science）



（Journal of Biological Chemistry）



（The Journal of Experimental Medicine）
虽然具体要求可能有些不同，但这几家期刊都强调了一点，那就是图像的对比度不能过高，必须保留背景信息。既然如此，那到底合格的Western Blot数据长啥样呢？各期刊也给出了自己的例子。



（Journal of Cell Science，Best Practices: gels, blots and images in JCS figures）



（The Journal of Experimental Medicine，Gel Image Guide 2016）



（Journal of Biological Chemistry, Good practices for preparing publication-quality figures）
    如何避免缺乏背景细节的数据呢？首先要保证您的成像系统及方法具备足够的动态范围(bit depth)。8bit深度的拍摄效果看上去图片背景很干净，同时也意味着丢失了许多背景信息，所以想要尽可能的保留背景信息的话，一定要采用16bit深度来拍摄。这里稍微科普下8bit和16bit的差距了，对于灰度图像，每个像素用一个字节（8bit）表示，一幅图像可以有256级灰度；若每个像素用两个字节（16bit）表示，一幅图像可以有65536级灰度。为了保留更多实验细节，16bit 的TIF图像更为常见。16bit的TIF图片在降低对比度后可以显示出均一、细腻的灰色背景，而8bit的TIF图片降低对比度后可以发现有很多背景信息丢失，而且图片颗粒感很强！图片质量很差！根本无法显示成像对象的细节信息。所以，千万不要以为某些8bit数据能给您带来更好的结果体验（背景干净，条带清晰），也许它会因为缺乏背景信息而被当作虚假数据导致你的文章被拒。

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