如何看待部分研究团队/研究生整日只做WB(西方印记)？

风云

有一些研究团队的研究生似乎每天啥实验都不做，就只做wb，此类研究团队的论文里面也就少许试剂盒和染色外通篇都是wb和ip，研究生似乎脑子里面只知道用wb测一下蛋白表达水平，偶尔做点ip就撑起了整片文章。且不说不是人人都做得起空转空单，cut-run,乳酸化琥珀酰，单核细胞测序等，但整个团队也从来不做emsa.gst.萤光素酶，彗星实验.流式分选等其他类型的实验，也不用全自动wb仪，是沉迷手动跑胶吗？还是用wb可以阐明一切科学问题呢？

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清风寡欲

分子印迹技术是20世纪70年代发展起来的一种检测和分析生物大分子的新方法，该技术已被应用于DNA、RNA和蛋白质等研究领域。基于该技术的实验方法包括Western blot、Northern blot，Southern blot还有不太常见的Eastern blot等……对于blot这个大家族，初次看到，是不是已经开始犯迷糊了？其中的这四种blot技术，就像中国的四大名著、四大美女，尤其像是民国的四大家族，根据各自的“管辖范围”分成“南北西东”四个家族。




各种blot技术（图源：Wikipedia）

Blot，即印迹实验，是生物学实验中常用的检测和分析方法，是通过“印迹转移+标记检测”的方式将待检对象找出来的技术手段。整个过程可以简单描述为将待检生物大分子经电泳等方法分离后转移并固定在如硝酸纤维素膜（NC膜）、PVDF膜或尼龙（Nylon）膜上，然后用特异性识别物质（如探针）去识别，最后经显色反应（同位素放射自显影、荧光、化学发光等）在膜上显示出结果。
其中，最早出现的是Southern blot，也就是“南方家族”，它是检测DNA的一种方法；接着是“北方家族”Northern blot，主要检测RNA；再然后是“西方家族”Western blot，主要检测蛋白质；而另一个“东方家族”Eastern blot应用的很少，属于Western blot的一种变形，用于检测蛋白质上特定的修饰基团或部位。
Western Blot

Western Blot即蛋白质印迹杂交，也称免疫印迹实验，主要用于蛋白质检测领域，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。

WB蛋白质印迹法 (免疫印迹试验) 即 Western Blot，其工作原理是经过 PAGE (根据分子大小) 分离的蛋白质样品，转移到固相载体 (例如硝酸纤维素薄膜) 上，然后将目的蛋白与特异性抗体进行孵化。由于抗体只与目的蛋白结合，未结合的抗体被洗掉，只留下与目的蛋白结合的抗体。最后通过显影检测结合的抗体，条带灰度与蛋白量相对应，因此可以反映蛋白质的表达情况

WB的操作步骤包括：蛋白提取—电泳—转膜—封闭—抗体孵育—显色。



Western blot 的流程(图源MCE)

Estern Blot
Eastern Blot是一种检测蛋白质翻译后修饰的技术，其检测目标是蛋白质上特定的修饰基团或部位，如脂肪酸链、糖基、磷酸化的氨基酸等，通常要先用双向电泳将蛋白质分离，然后转到膜上，再用特异的探针去检测。Northern Blot
Northern Blot即RNA印迹杂交，主要用于RNA检测领域，如可通过检测RNA的表达水平来检测基因表达。Northern blot与Southern blot类似，只是不使用碱变性处理RNA，因为碱性溶液会使RNA水解，而是采用乙二醛或甲醛等使RNA变性。

Northern blot的检测原理也是只有具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下，才会按照碱基互补配对原则形成双链，该过程具有高度特异性。将提取出的RNA样品用含甲醛的琼脂糖凝胶电泳变性分离后，不同分子质量大小的RNA分布在凝胶上。将其原位转印至固相载体上，然后用特异性序列的非放射性标记的或放射性标记的探针与固相载体上的RNA进行杂交，通过显影观察条带的位置及强度，即RNA分子的大小和含量。

Northern blot的操作步骤包括：RNA提取—凝胶电泳—变性处理—转膜—固定——封闭—标记探针孵育—洗膜—放射自显影。



Northern blot的操作步骤（Alshammari et al., 2017）

Southern Blot
Southern Blot即DNA印迹杂交，是最早出现的印迹技术，主要用于DNA检测领域，如用于检测样品中的DNA及含量，分析DNA样品中是否有与探针序列同源的DNA片段以及验证检测片段的分子量大小等。

Southern blot的检测原理基于只有具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，才会按照碱基互补配对的原则特异性杂交形成双链。将经过限制性内切酶消化和琼脂糖凝胶电泳分离后的待测DNA样品变性断裂后，使各DNA片段的相对位置保持不变并转印到NC膜等固相载体上。将固定好的转印膜与加入的标记探针在相对严格的环境中进行杂交，只有二者之间有非常高的同源性时，才会按照碱基互补配对原则进行结合。经过洗涤后，用放射自显影或者其它技术进行检测，从而可以检测出特定DNA片段及其相对大小。

Southern blot的操作步骤包括：DNA提取—凝胶电泳—碱变性处理—转膜—固定—封闭—标记探针孵育—洗膜—放射自显影。



Southern blot的操作步骤（Bhagavan NV., 2002）

总的来讲，不管是哪种是印迹实验方法，都是通过“印迹转移+标记检测”的方式将待检对象找出来的技术手段，主要区别在于其检测的目标物质不同。



三种常用Blot技术的对比

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继续前进

当然是因为穷啊，难道是喜欢吸TEMED？

长长的路

wb那可是玄学实验啊，做上几个月实属正常
而且wb是目前最常用的蛋白检测手段，你说的那些也不能完全替代wb吧

检验医师

想开点，有理想是好的，但如果是医学生，很多只是被逼着做科研，而且说不定他们实验室条件只能做这个。
负责任的科研只是肉食者谋之，而且和科研制度+运作模式有关，和某个实验室会不会这么做关系不大，如果它是普遍现象，说明宏观科研制度/政策导向，就是有问题的。
有没有想过正常的国外临床医生，不会被强制要求做科研？

大力水手

以WB的成功率，什么人能沉迷做这个怕不是个变态。全自动WB也得你买得起。
没有任何实验手段能一口气回答所有问题。但是你说的那些东西没有任何一个能完全代替WB和co-IP。举几个例子：EMSA需要蛋白质和DNA互作，生物荧光需要表达荧光酶，流式…PPI你能用普通流式证明啥啊？
其实现在蛋白质组学也没有以前那么贵了，需要的样本量也比WB少得多，但就是有很多实验室没那个条件。
没什么可酸的。