流式细胞仪只能测量细胞内细胞因子吗？

wolf

流式细胞仪只能测量细胞内细胞因子吗，我想了解肿瘤患者外周血里面细胞因子水平，elsia因实验室特殊原因用不了，所以能不能直接用流式细胞仪测？谢谢

原文地址：https://www.zhihu.com/question/413381581

队长是我

首先回答：不是，流式细胞仪不仅可以测量细胞内的细胞因子，还可以检测细胞表面以及细胞核内的因子。
流式抗体可以根据目标分子的定位分为细胞膜表面标志物抗体、细胞质标志物抗体和细胞核标志物抗体。
一般来说，绝大部分CD分子指标，都是细胞表面指标；IL白介系列、IFN-γ、TNF-α等，属于胞内指标；而最常见的核内染色指标是Foxp3。


流式细胞仪检测的原理：

流式细胞仪接收到的荧光信号来源于结合在样品细胞上的荧光素，流式细胞术最常使用的是荧光素偶联抗体，由荧光素和抗体两部分组成。在标记样品细胞时，荧光素偶联抗体中的抗体能够与相应的抗原分子特异性结合，这时带有该抗原分子的细胞就结合有荧光素偶联抗体，其中的荧光素被相应激光激发后能够发射特定波长的荧光信号，荧光信号被相应荧光通道接收，根据接收到的荧光信号的强弱就可以判断该细胞表达相应抗原分子的情况。
那我们所要检测的因子位置不同，相应的检测步骤自然不同，下面整合了三种不同的操作步骤：
细胞表面抗原染色流程：



胞内/核内染色实验步骤：

同花顺

流式细胞仪还可以检测各组液体组分中的可溶性蛋白质，利用流式微球技术就可以实现，详情参考视频及瑞博奥流式产品https://www.raybiotech.com/rayplex-cytometric-bead-arrays/

大力水手

流式细胞仪可以高通量检测血清中的细胞因子，高效快速，比ELISA方便很多，而且线性范围以及最低检测线等指标也优于ELISA。推荐碧芯生物的Beadstar-mPlexTM人类多细胞因子检测试剂盒，这款产品可一次检测7种人类细胞因子，操作简单，并且有专业的技术人员帮您进行技术知道和分析结果。
检测细胞因子：IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF-α、IFN-γ
检测方法：流式荧光法


样本：细胞培养上清、血清
所需样本量：血清（5-10 mL）；细胞上清（25-50 mL）
适应机型：通用性强，普通流式机型均可检测
检测项目：灵活组合检测项目（7种人类细胞因子可以任选各种组合）
Beadstar-mPlexTM人类多细胞因子检测试剂盒-碧芯生物科技（海南省）有限公司

检验医师

ELISA属于最简单方便的实验之一了，买支合适的抗体就能用。当然，如果检测多个因子用ELISA就需要大量样本和多个抗体，也是价格不菲。不知道是因为何种原因无法进行。
现在也有检测多因子的手段，例如MSD，就是试剂盒、仪器可能比较贵，样品珍贵且少，又想一次测多个指标的话也可以考虑。
硬要用流式做这实验也不是不可以。但鉴于流式仪检测的是粒子，通常需要用到一些颗粒载体才能够对分泌出的因子进行吸附补获。
其实还可以用高效液相（HPLC）也可以，挺方便的，但就是要用到标准品咯。
当然也有其他手段，如题，题主用的是外周血，也可以把细胞去除，直接上清蛋白变性跑Western，但可能会遇到要蒸发水分提高浓度的情况，再者选用内参也是个小困难。常用的是IgG。但能用这个方法，相信也有抗体能包ELISA了…
好了，说多了，以上仅供参考。

队长是我

应用场景还是很多的，比如：分离或者区分不同种类的细胞，分离染色体，DNA含量测定等等。可以去它的官网看看。