细胞免疫荧光法

千姿百态

不知道接下来写啥，想写ELISA，但是又觉得太过于简单，CO-IP又觉得可能会和ChIP重复，那就写一下细胞的免疫荧光，这个还有组织切片和染色相近的，组织的就等写到动物实验系列再一起写吧。细胞免疫荧光也有点像western blot。
免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色)，可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位。----哈哈哈百度的，大概就是这个意思吧。
免疫荧光法

（1）细胞固定：使用20 mm共聚焦培养皿培养细胞，并进行相应的实验处理（根据实验需要，加药或者其他细胞处理），细胞处理结束后，吸走共聚焦培养皿中的溶剂，使用1mL 4％多聚甲醛（pH 7.4）固定30 min，小心吸走多聚甲醛，使用1 mL无菌的PBS洗涤3次，每次5 min；
（2）细胞通透：使用200 μL的0.2 % TritonX100（现配现用）通透10 min后，使用1 mL无菌的PBS洗涤3次，每次5 min；
（3）封闭：使用1% BSA（使用PBST配置）室温封闭60 min；（此步也可以用抗体稀释液封闭）
（4）一抗孵育：使用含目的蛋白的一抗稀释液（使用1 %BSA或者抗体稀释液稀释），并在4 ℃条件下孵育过夜；
（5）二抗孵育：使用1 mL无菌的PBS洗涤3次，每次5 min，并在黑暗条件下使用含荧光标签二抗的稀释液，室温孵育60 min；
（6）核染色：使用1 mL无菌的PBS洗涤3次，每次5 min，并在黑暗条件下使用DAPI进行核染色，室温染色5 min；
（7）使用1 mL无菌的PBS洗涤3次，每次5 min，最后加入PBS避光保存并通过共聚焦显微镜下观察；
（8）若所观察的目的蛋白含有荧光标签，如eGFP，则可直接固定或直接核染色，然后在共聚焦显微镜下观察。

这部分没找到相应的视频，但是操作也算比较简单，需要视频的也可以搜搜看b站。

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