核酸提取小贴士

虎威将军

核酸提取是分子生物学研究的基础，而提取的核酸质量好坏也是决定下游实验成败的关键因素之一。因此了解核酸提取的基本原理和方法至关重要，一起来学习下吧！
一、什么是核酸
核酸分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两类，其中DNA主要集中在细胞核内、叶绿体和线粒体中，而RNA则主要分布在细胞质中。核酸是分子生物学研究的主要对象，那么无论是对核酸的结构还是核酸的功能进行研究，都需要对核酸进行提取和纯化。
二、核酸提取的基本步骤
1.裂解细胞，释放核酸：使用裂解液裂解细胞，使核酸游离在裂解体系中；
2.核酸的分离与纯化：除去和核酸结合的多糖、脂类、蛋白质等生物大分子物质以及其他杂志分子；
3.核酸富集与洗脱：采用洗脱液处理，富集核酸。
三、核酸提取纯化的常见方法与选择
（一）核酸提取方法——溶液法、柱膜法、磁珠法
1.溶液法


最经典的核酸提取方法是溶液法。细胞破碎或者组织匀浆后用苯酚氯仿处理，在水相中主要是以DNA为主，有机相中主要是多糖和脂类物质，蛋白质沉淀于两相之间。离心分层后取水层，经过多次重复操作，并合并含核酸的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇/异丙醇来沉淀核酸，然后再进行分离和纯化、溶解后即可得到高纯度核酸。
2.柱膜法


柱膜法原理是基于硅胶膜吸附。硅胶膜表面存在的硅醇基团呈弱酸性，水化后带负电。如果溶液中存在一定浓度的阳离子时，会中和DNA硅醇基团之间的表面负电荷，从而使DNA能够牢固地吸附在硅胶膜表面。反之，如果处于低盐水溶液时，DNA磷酸基团和硅胶膜的硅醇基团之间会存在静电排斥，硅胶膜将DNA释放出来。
3.磁珠法


磁珠法运用的是纳米技术，对超顺磁性纳米颗粒的表面进行修饰和改良后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别并高效结合。核酸结合到磁珠上主要是依靠氢键作用、静电作用和疏水作用。在异硫氰酸胍、盐酸胍和外加磁场的作用下，能从样本中将核酸分离出来，并洗去非特异性吸附的杂质，得到纯化后的核酸。
（二）磁珠法与柱膜法的比较


（三）提取方法的选择
如果对核酸提取的质量要求不高，可以选择经济实惠的溶液法，选择柱膜法还是磁珠法自动化提取，基本上取决于样本数量，针对大批量的样本，优选磁珠法自动化提取。如果对样本数量较少，则可以选择柱膜法，既快速又经济实用。

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