HIV 的检测方法有哪些？

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HIV 的检测方法有哪些？
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同花顺

细分当前HIV检测有上百种方法，但是根据检测物质分类也就六七种，不同HIV检测试剂对HIV感染者进行抗体早期检测的最佳的时间也不同。第一代～第四代 HIV 试剂检测到对应物质的时间分别为,42～70d ,28～42d（甚至更短）,22d 和16d（抗原5pg ,甚至更短）核酸检测7-11天。


HIV的实验室诊断方法如下：
1.P24抗原测定：HIV 感染机体后在体内繁殖刺激体内产生抗体，一般约需1～2周。P24抗原是 HIV 核心结构抗原国外于2000年研制成第四代试剂，可同时检测 P24抗原和抗体，其阳性检测时间比单测抗体提前约1周。在急性感染后抗体阴性的窗口期，检测 P24抗原可缩短窗口期。多用于 HIV 初期感染和母婴传播的早期筛查、监测疗效和疾病 预后评估，一般用双抗体夹心酶免疫法（EIA）和化学发光法。
2.HIV 抗体测定：人在感染 HIV 2～3个周后出现 HIV 抗 体,可延续至终身,是感染的重要标志。抗体测定分初筛和 确认检测。 目前常用的标准筛查试验是 EIA 和化学发光法。在高度提纯 的重组融合蛋白基础上,再加多肽包被,使其有广泛的检出 位点,包含 HIV-1,HIV-2和 O 亚型重组抗原,以确保测得 O 亚型。若标本中有 HIV 相应抗体存在,包被的抗原与标本中 的抗体及 HIV1／2抗原标记酶形成复合物,并通过显色剂 TMB 显色,来检测标本中是否带有HIV 抗体。实验室样本结 果的判别根据质控样本的阴、阳性结果的临界值决定。筛选 试验呈阳性反应的样本,但还必须再一式二份予以复检。若 重复试验为阳性,该样本被认为是“复检阳性反应”,但还必须进一步用免疫印迹法（WB）或免疫荧光法（FIA）进行确证试验。只有 EIA 筛查阳性,确认试验也为阳性方可被确定为 HIV 试验阳性。
随着基因、重组技术的发展,HIV 试剂盒的制造有了很 大进步。合成肽来源稳定,有良好的重复性；多肽中包含若 干个抗原决定簇,可提高检测灵敏度,缩短窗口期。此类试 剂以第三代试剂为代表,其敏感性和特异性均达99％以上。
3.HIV确认试验：我国目前规定主要用 WB 对筛查试验 结果阳性的血清 HIV 抗体进行核心（P17、P24、P55）、聚合酶 （P31、P51、P66）和包膜蛋白（gP41、gP120、gP160）确认检测（表 1）。若阳性指示条带未显示或无可疑条带存在,则该试验为 阴性。如果该试验出现可疑条带（HIV 感染不确定）,可能为来自HIV感染者早期不完全抗体反应或为非感染者中存在的非特异性交叉反应抗体。尤其在高危病人中的不确定性结果,必须在3个月后进行再次检测,并严密观察。对持续1年以上的 WB 结果不确定型患者应考虑为阴性。
                                                     WB 检测 HIV 蛋白类型



4.HIV 快速试验：指POCT 就地检测或即刻检测,适用于 紧急检验。当前美国 FDA 批准的HIV-1感染快速试验,为单 一诊断系统（Single use diagnostic system）。它可在1h内报告结果,其敏感性和特异性也可与标准 EIA 比较。美国 Abbott 公司的 Determine 硒标免疫层析技术和 Ey 的胶体金快 速试验,均已通过我国药品监督部门的批准和批检。具有携 带方便,操作简单,可保存结果等优点。适用于我国边远地 区的自采血供血单位作血液筛查,在临床上只限用于急诊或 估计难以复诊,而具有高危行为的 HIV 病毒感染疑似者的抗体筛查,也可用于 EIA结果阳性样本的复核。但必须注意在 HIV感染很低的人群中,使用快速试验,有时会出现 HIV抗体假阳性。因此,卫生部规定在快速试验阳性结果报告之 前,必须再用 EIA 和 WB 作复检和确认。
5.病毒载量：HIV-1病毒载量指体内病毒复制的数量,一 般以血浆 HIV RNA 的拷贝数表示。病毒载量测定的方法有 逆转录聚合酶链反应、分枝 DNA 信号扩大系统、核酸序列扩 增系统和二对引物二种酶的扩增系统。其检测意义在于：① 早期辅助诊断：可在其他血清学和病毒学标志出现前检出病 毒核酸,使窗口期缩短 6～11∙5d 。也可判定无症状,而血清 阴性患者潜在的 HIV 传染性。② 用于预测疾病病程和监测 抗病毒治疗的疗效与病毒水平；③用 PCR 可判定婴儿出生 后18个月内,他们血液中的 HIV-IgG 抗体是否为来自于母体 的 HIV-IgG 抗体,婴儿是否被感染上 HIV 。
6.T 淋巴细胞测定（辅助测定）：HIV 感染的主要靶细胞是 CD4 淋巴 细胞,机体呈现细胞免疫应答,还包括 NK 细胞和 T 淋巴细 胞的变化。NK 细胞在抗 HIV 过程中,不仅能直接攻击 HIV , 还能提高 CD8＋细胞应答,刺激分泌 γ-干扰素。随病程的发 展,NK 细胞应答下降,甚至凋亡,HIV 复制加快。健康人 CD4＋和 CD8＋淋巴细胞比例为21∶,如果比值＜1,意味着免疫 状况不佳,比值越低细胞免疫缺 陷越重。 临床研究表明, CD4＋细胞数下降与 HIV RNA 升高呈负相关。
7.新生儿HIV 感染的特殊试验：婴儿HIV 感染可发生在 子宫内、引产或出生过程中或哺乳喂养时。如母亲为 AIDS  患者,可从其新生儿体内检测到来自母亲的抗 HIV-IgG 抗 体,在这些 HIV-IgG 抗体阳性的新生儿中,有 20％ ～60％为 HIV 感染。对新生婴儿 HIV 感染 的诊断可检测前病毒 的 DNA 和病毒的 RNA 水平,而 PCR 是 HIV 前病毒 DNA 检测较 理想的试验。前病毒DNA 试验可在出生后 48h 内的38％的 婴儿或生后 14d 的 93％的婴儿中检测到 HIV 前病毒 DNA。 对阴性结果的婴儿,应在第 14天再检测 1次,并在 1～2个 月和 3～6个月再重复检验。对试验阳性者,应尽早用第二 份标本进行确认诊断。如 6个月后 HIV-IgG 试验阴性,可排 除 HIV 感染。必要时还可进行追踪检查。
结合当地医疗条件，自身的实际情况，选择合适的时间去做对应的检测实验，坦然接受阴性结果，不质疑，不多想，才能有效走出恐艾，最后祝愿大家都能脱恐

感恩由您

核酸检测、四代抗原抗体检测，三代抗体检测等等，我具体来说说：

• 目前发展到了几代[1]？
  

如上图所示，目前已经是第四代的检测技术了，
从 1985年出现了第一个商用 HIV筛查试剂起，HIV检测经历了由抗体检测到抗原抗体复合检测的发展历程，
前三代试剂仅检测抗体（第一代、第二代检测HIV-IgG抗体；第三代HIV-IgG 和IgM 抗体），
第四代试剂则在原来的基础上，增加了p24 抗原。
从时间上，第二代比第一代平均缩短了20天左右，而第三代试剂则在三周左右可以检出，第四代试剂的优势在于急性期 p24 抗原的浓度较高，因此感染后 2 周左右可检出。
此外，还有核酸定量、定性检测技术，可以在一周左右检出。
2.初筛检测方法有哪些[2]呢？
酶联免疫吸附试验（ELISA）
原理是利用抗原抗体特异性结合的特性,通过酶催化和放大作用检测样本中是否含有 HIV 抗体和 / 或抗原。
可使用血液（包含血清、血浆和干血斑）、尿液样本，
既可检测 HIV抗体，也可联合检测 HIV 抗体抗原。
特点是：检测周期较长,通常需要1~2h，灵敏度高,但特异性较低，个别存在假阳性的可能性，只能用于筛查，不用于诊断。
化学发光试验（CLIA）
原理是利用发光底物代替酶标底物,通过读取发光值对结果进行判读。
可使用血液(包含血清和血浆)样本，
既可检测抗体，也可联合检测抗体抗原。
特点是试剂灵敏度更高、检测周期更短，自动化程度较高，灵敏度及特异性均较高。
快速检测（RT）
可使用血液、尿液、口腔黏膜渗出液等类型样本，包括检测抗体和同时检测抗体和抗原，操作简便快速，可用于个体自助检测。一般可在 10～30分钟内得出结果。
目前常用的有：免疫层析试验，明胶颗粒凝集试验，免疫渗滤试验。
目前市面上有各种品牌各种类型的检测试纸，有四代的抗原抗原检测，还有三代的抗体检测等。
3.抗体确证试验有哪些？
免疫印迹试验（WB）
WB 可使用血清、血浆和干血斑样本，采用间接法检测样本中的抗 HIV-1/HIV-2特异性抗体。
采用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分离开来，然后再把这些分离的不同蛋白带转移到硝酸纤维素膜上（或 PVDF 膜）。
将此膜切割成条状，每一膜条上均含有经电泳分离过的 HIV 抗原。待测样本经适当稀释后，加至硝酸纤维素膜上，恒温振荡，使其充分接触反应，血清中若含有 HIV 抗体，就会与膜条上抗原带相结合。
重组/线性免疫印迹试验（RIBA/LIA）
可使用血清、血浆和干血斑样本，采用间接法检测样本中的HIV-1/HIV-2 特异性抗体。
试剂盒的膜条上包被有 HIV-1/HIV-2 不同的重组抗原或合成多肽抗原，加入待测样本后，其中的相应抗体与抗原发生特异性的免疫反应，
随后加入酶标记抗人IgG（碱性磷酸酶标记）与 HIV 特异性 IgG 抗体相结合，加入显色底物后，在碱性磷酸酶的催化下，特异性抗体的结合部位出现肉眼可见的条带。
4.检测报告怎么看？
首先是筛查报告，
筛查试验无反应，报告为“HIV 抗体阴性”。
筛查试验有反应，必须进行复检，两次均无反应，报告为“HIV 抗体阴性”，
两次均有反应，或一个有反应一个无反应，还需进一步进行“补充试验”。


再来是补充实验，也就是确证实验，如下图所示：





5.检测的建议：
针对有高危性行为又没有做好安全防护的人群，我一般建议是在窗口期过后去医疗机构做检测，由于实验室有专业人员又有质控措施，结果是准确的。
如果不好意思去医院，想要自己用试制自测，那么一定要按适用的说明书来，不然结果就不准确了。
另外，如果有使用阻断药，那么检测窗口期就得延长，
还有，孕妇检测的话，存在一定的假阳性。
6.诊断标准[3]：
成人、青少年及18月龄以上儿童，符合下列一项者即可诊断HIV感染：① HIV抗体筛查试验阳性和HIV补充试验阳性（抗体补充试验阳性或核酸定性检测阳性或核酸定量>1 000拷贝/mL）；②有流行病学史或AIDS相关临床表现，2次HIV核酸检测均为阳性；③ HIV分离试验阳性。
我是Dr大钟，疾控钟医生，高危行为风险评估，恐艾脱恐，专业疏导，可随时咨询：
Dr大钟：建议收藏：再谈感染HIV后窗口期到底是多长？Dr大钟：建议收藏：超全的HIV行为风险评估（wtbdkj+wtzdkj+wtxj+wtgj+ytxj+ytgj+dfj)

长长的路

最近根据很多恐艾咨询者描述，自己网购了试纸自测，但是不知道是因为自己储存不当，还是说本身试纸的质量有问题，自测几次结果有时候会出现差异，更有甚者同时测试好几张，结果竟然会有差异，尤其是出现了弱阳结果，瞬间心理破防，陷入无限的恐惧中无法自拔，即使后边去医院检测一直是阴性，依然无法从恐艾中走出，严重影响日常生活。
针对此类提问现在就讲我们医院内的检测方法和流程与大家做一个分享，因为很多东西都是说明书上摘抄的，仅供参考，如有雷同纯属巧合。
首先实验室检测一般分为初筛实验和确诊实验，很多地方医院由于实验室级别和资质问题，有时候只做初筛实验，最后的确诊实验都是去当地疾控部门做，现在我们就浅谈一下几种实验的的原理以及优劣性。



（一）筛选试验
快速检测（乳胶法、胶体金、胶体硒）
特点：无需仪器，操作简单。可以从正规药店，机构，网店购买。
结果判读：一条杠为阴，两条杠为阳。

• 酶联免疫法(ELISA法既可以检测抗原，也可以检测抗体）
  

原理：抗原抗体特异性结合，再加底物显色。用仪器测吸光度值。
操作流程示意图



优点：免疫学检测技术具有检测速度快、费用低廉、灵敏度高和选择性强等优点。它将酶催化反应的放大作用和抗原抗体亲和反应的高度专一性、特异性相结合，可以机器判读，便于自动化和一次性检测大量标本。
缺点：1.检测抗原时，与免疫荧光法相比，敏感度有待提高，一般只能检测可溶性病毒抗原。
          2.操作过程有些繁琐，反应需要时间，不能一蹴而就。

• 化学发光法
  

原理：抗原抗体特异性结合，再加荧光标记的底物，测发光值。

优点：1.化学发光采用吖啶酯作为发光底物，它具有灵敏度高，干扰因素少、发光强度大、光子产率不受抗原抗体结合干扰、标记物稳定等诸多特点，此技术的应用极大程度的缩短了病人的检测窗口期，对于灰区附近的弱阳性标本，漏检率低
2.线性量程范围宽，对传染病患者能做到早发现，早诊断，早治疗，早干预。
缺点：成本太高，多为进口仪器，试剂和仪器较贵
确证实验的检测方法
在2020年之前，确证实验是以检测抗体的免疫印迹法为金标准。在2020年之后，增加了核酸检测，两者都可以作为阳性判定的标准。

• 免疫印迹法
  

原理：利用特定抗体能够专一结合其抗原蛋白质的原理来对样品进行着色，通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息，来分析检测特定蛋白质的生物学检测技术。应用到HIV的检测上，就是将HIV的不同蛋白（抗原）分离开，转移到膜上。血清中抗体和这些抗原结合，加底物显色。
优点：细分抗体，更加谨慎，阳性判定的最终标准。

• 核酸检测
  

原理：核酸检测
原理：HIV的核酸检测也就是HIVRNA的检测，通过PCR扩增，直接检测病毒本身。
特点：这个检测的窗口期时间更短，一般人感染了艾滋病病毒过7到10天左右在血液里面就会检测到艾滋病病毒，也就是检测到艾滋病的核酸。在两周左右血液里面的艾滋病的核酸就会达到一个高峰的状态。所以如果进行艾滋病的核酸检测结果是阳性的，那就一定可以确诊是艾滋病的感染。

继续前进

按检测流程，分筛查实验（初筛）和确证实验（也叫补充实验）。其中，筛查实验呈阳性的，才需要进一步复检，做确证实验。见下图。


<hr/>筛查实验的几种方法

绝大多数咨询者用到的方法，无论是自测还是医疗机构检测，都属于筛查实验阶段的方法。
方法主要包括快速检测（乳胶法、胶体金、胶体硒）、酶联免疫法、化学发光法。

• 快速检测
  

特点：无需仪器，操作简单。如果咨询者因为嫌麻烦或者羞耻心等原因，不愿意去医疗单位，那么可以从正规去到购买自测。
结果判读：一条杠为阴，两条杠为阳。

• 酶联免疫法
  

原理：抗原抗体特异性结合，再加底物显色。用仪器测吸光度值。
特点：仪器检测，灵敏度更高。
结果判读：比值小于1为阴性，比值大于1为阳性。

• 化学发光法
  

原理：抗原抗体特异性结合，再加荧光标记的底物，测发光值。
特点：仪器检测，灵敏度高。
结果判读：比值小于1为阴性，大于1为阳性。
关于筛查实验的几种方法，再强调两点：
1、根据是否能检测p24抗原，试剂（试纸）又分为三代试剂和四代试剂。具体可见之前文章。

HIV检测试剂，三代和四代有什么区别？如何区分？试剂有没有感染风险？
2、无论是哪种方法，结果都是可靠的。快速检测（试纸）虽然没有酶联免疫和化学发光的灵敏度高，但也只是相对较低而已。绝大数试纸的灵敏性都在99%以上，结果完全可信。
<hr/>确证实验的检测方法

在2020年之前，确证实验是以检测抗体的免疫印迹法为金标准。在2020年之后，增加了核酸检测，两者都可以作为阳性判定的标准。

• 免疫印迹法
  

原理：将HIV的不同蛋白（抗原）分离开，转移到膜上。血清中抗体和这些抗原结合，加底物显色。
特点：细分抗体，更加谨慎，阳性判定的最终标准。
结果判读：三条或三条以上反应条带（有的试剂是两条）。
具体可见之前文章。
艾滋病确证结果长这样。

• 核酸检测
  

原理：通过PCR扩增，直接检测病毒本身。
特点：因为病毒比抗原抗体出现更早，所以可缩短窗口期。
结果判读：分定性和定量。
具体可见之前文章。
什么情况要做HIV核酸检测？怎么看化验单？关于确证实验，我再强调一点：
绝大多数咨询者初筛都是阴性，所以根本走不到确证实验这一步。需要注意的是，假如初筛是阳性（或者待确定），先不要绝望慌张。因为初筛实验里面，有相当一部分假阳性。最终的结果还是要以确证实验为准。
以上。
<hr/>想要系统了解更多艾滋病相关内容，可见下文。
艾滋病专栏文章索引

长长的路

检测艾滋，对目前国内从基层到大医院开展的项目来说，总的来说分为三大类：
一、抗体检测
二、抗原抗体检测
三、核酸检测



来源：ws-293-2019

从ws-293-2019对窗口期的定义中我们可以看见，目前HIV主要检测物为：抗体、抗原、核酸。
一、抗体检测

抗体检测分个HIV抗体筛查实验和HIV确证实验。
1.HIV抗体筛查实验
检测方法有酶联免疫吸附实验、化学发光或免疫荧光实验、免疫层析实验、免疫凝集实验、免疫渗滤实验。
其中医院以及疾控实验室里面最常用的有：酶联免疫吸附实验、化学发光实验。
各大基层卫生院和自己购入的自测试纸（快检试纸）其实就是所谓的免疫层析实验。
2.HIV确证实验
确证实验是在获得筛查实验结果后，为了准确判断，继续检测血液有无HIV抗体。
确证实验包括：免疫印迹实验、重组/线性免疫印迹实验，免疫层析实验、免疫渗滤实验。我国各大确证实验室常用的是免疫印迹实验。
二、抗原抗体检测

抗原抗体检测也是属于筛查实验，因为比抗体检测多加了一个P24抗原的检测，因此窗口期较抗体初筛实验提前了1周左右。
抗原抗体检测方法有：酶联免疫吸附实验、化学发光或免疫荧光实验、免疫层析实验、免疫凝集实验、免疫渗滤实验。
其中医院以及疾控实验室里面最常用的有：酶联免疫吸附实验、化学发光实验。
目前我国流通的抗原抗体检测的自测试纸（快检试纸）为进口的雅培。
三、核酸检测

核酸检测目前常用作HIV的补充实验，在以下情况中最容易用到。
1、当用四代试剂（抗原抗体联合检测试剂）测出来为有反应，且用抗体试剂双孔/双份或两种抗体试剂复检后均无反应的样品，考虑此时可能处在HIV感染的急性期，抗原测出来而抗体没测出来，首选HIV-1核酸检测。
2、当筛查实验为有反应而确证实验为不确定时，如果病人有想早点知道结果的诉求，可以推荐做HIV-1核酸检测。



来源：全国艾滋病检测技术规范（2020年修订版）

核酸检测分为：RNA检测和DNA检测。
目前常用的是RNA检测，也就是常说的病毒载量检测。虽然没有正式文件推荐核酸检测作为HIV的初筛实验，这个并不代表HIV核酸检测的灵敏度、准确度不如抗体或者抗原抗体检测的好，主要原因在于核酸检测价格较抗体和抗原抗体检测昂贵且开展的医院少，没有普及推广。
如果在没有服用阻断药的情况下，想早点知道自己是否感染艾滋且能找到做核酸检测的医院情况下，肯定是做核酸检测最快最直观。