跑western blot，我已经调整了上样量为什么我的内参还是跑不齐？

心中u你

跑western blot，我已经调整了上样量为什么我的内参还是跑不齐？
原文地址：https://www.zhihu.com/question/25951529

卡卡

经过缜密的灰度分析然后按比例调整，理论上应该是能跑齐的，如果不能，可能是转膜不均匀或抗体孵育不均匀。

卡卡

1.调整上样量，如果还是调不齐，建议做灰度扫描，将目的蛋白的灰度值比上对应的内参，这样比较准确，目前很多文章的western图都会附上相应的灰度扫描结果，这样更加定量和直观。
2.你的胶的问题，可能没凝好；
具体可看
western常见问题

感恩由您

有些药物会影响内参表达

继续前进

请问在哪里能找到western blot 的视频呢?我需要做，但光看说明不太会，先谢谢了～

大力水手

内参不齐有很多原因。首先分析自己定量是否准确；其次上样时候是否有飘起蛋白；转膜时候是否无气泡，滤纸是否平整。之后标抗体，只要是抗体分布均匀了，一般都不会有大问题了的。