一文教你如何读懂Western Blot实验结果图

奋斗的小鸟

Western Blot是一种用于检测特定蛋白质在样本中的表达水平的实验技术。在分析Western Blot实验结果图时，了解一些基本概念和步骤是非常重要的。下面是一些关键点，可以帮助你更好地理解Western Blot的结果图：内参（Internal Control）：  内参是实验中用来标准化不同样本之间的蛋白质含量的蛋白质。内参通常是一种在细胞中普遍表达且表达水平相对稳定的蛋白质，其表达水平不受实验条件或处理的影响。内参的作用是保证不同样本之间的比较是公平的，因为它们可能在蛋白质的总含量上有所不同。  常见的内参包括β-actin、GAPDH等。


灰度值（Optical Density, OD）：  在Western Blot实验中，蛋白质条带的强度通常通过其灰度值来量化。灰度值反映了蛋白质条带的密度或强度。灰度值越高，表示相应蛋白质的表达水平越高。     通常使用图像分析软件来测量条带的灰度值,灰度值的测定，具体操作需要的可以回看，Western blot （WB）条带灰度值如何测量？从原理到实践-纯干货。结果分析：比较条带强度：通过比较不同样本中目标蛋白质条带的灰度值，可以评估其相对表达水平。标准化：将目标蛋白质的灰度值除以内参的灰度值，得到标准化后的值，这样可以消除样本间蛋白质总量的差异。统计分析：如果实验设计允许，可以通过统计方法（如t-test或ANOVA）来评估不同样本或处理组之间的差异是否具有统计学意义。


    看完上面那些知识，再看这个图就比较清楚了，对照组Vav1比疾病组（Diabetes）条带要淡，表达量低，柱状图标注一个※，说明两组有显著性差异。Vav2和Vav3两组间条带灰度看上去差不多，统计学上没有显著性差异。重复实验：为了确保结果的可靠性，Western Blot实验通常需要有技术重复和生物学三重复，以评估结果的一致性。

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