Western blot条带图片排版和数据分析过程

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Western blot免疫印迹（以下简称WB）实验作为检测蛋白表达相对定量的技术，在完成Western blot实验后，得到的是蛋白条带，还需要再对Western blot条带进行结果处理。对于WB结果处理的过程，主要分为3个部分:
1. 用PS软件进行排版；
2. 用image J进行灰度值分析；
3. 用prism软件进行作图分析。

一、 图片排版
1. 打开PS软件，打开WB图。选择【标尺工具】，对着WB条带画一条直线，接着点击【拉直图层】



Western blot条带显影图

2. 新建画布，将用【矩形选择框工具】选中条带，复制到新建的画布中；在不改变台条带趋势的情况下，可以对条带进行曝光度调整（图像-调整-曝光度）；


3. 同样的方法，我们可以将第二个条带第三个条带拖进来



4. 描边。选择图片后，点击编辑-描边，修改宽度和颜色


5. 最后标注就可以了。


二、 灰度值分析
1. 打开image J软件，打开以上排版好的WB图；
2. 转为灰度图片：点击image- type-8 bit
3. 设计参数：点击analysis-set measurments



4. 设计单位：点击analysis-set scale ，选择pixel单位



5. 分析条带：选择矩形选框工具，框住条带，点击Analysis-Gels-Selecit First Lane（或快捷键control +1），然乎再次点击Analysis-Gels-Plot Lanes（或快捷键control +3）
6. 封闭开口：选择直线工具，将开口封住，按住shift键，同时画下直线，将开口封住



6. 得出数据：选择魔棒工具，一次点击各个框，即可得到相对应的灰度值数据


三、 数据分析
1. 对于我们得到的数据，可以将目的蛋白的条带数值/内参条带的数值，再将得出的数值以对照组数据为参考做均一化处理，即可得到表达趋势值。
2. 我们可以将得到的数值标注在wb条带的下方，如果进行了3次重复实验，也可以通过prism软件进行数据处理，做成柱状图并进行统计学分析。

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