BNP及NT-proBNP异质性对检测的影响

Okay欧凯

1.BNP及NT-proBNP异质性
1.1BNP的裂解
血浆和组织中有几种蛋白水解酶可以降解利钠肽，包括脑啡肽酶、二肽基肽酶IV、胰岛素降解酶和肽基精氨酸醛蛋白酶[2]。在体内，受损血管的腔内表面，带负电荷的表面激活凝固接触活化系统后，钾激肽激酶可能会对BNP的C端结构进行水解。在血液循环中（或采血后），BNP N端的丝氨酸和脯氨酸残基上可能会迅速发生蛋白水解，这使得BNP的降解更加敏感[3]。
1.2NT-proBNP的裂解
大多数免疫反应性的NT-proBNP明显小于NT-proBNP 1-76。迄今为止，尚未用高效液相色谱法在心力衰竭患者血浆中检测到完整的NT-proBNP（1-76氨基酸）。HPLC分析表明，循环免疫反应性的NT-proBNP具有很强的异质性，且两端都可能发生裂解，并且这种裂解在血清中比在血浆中更加明显[3]。有证据显示，NT-proBNP的N端易受到血液中发生的修饰并改变其免疫反应性，C端易被蛋白水解。但某些特定的肽表位仍显示出较高的稳定性，可用于免疫检测[1]。
1.3NT-proBNP的糖基化修饰
大多数用于NT-proBNP免疫测定的抗体都是针对其末端的。NT-proBNP中部表位不适于检测，因为中部位点易被糖基化修饰或形成低聚物，阻碍抗体与表位的结合，导至NT-proBNP检测结果偏低。有研究建议NT-proBNP检测的最佳候选表位为N端13-24和C端63-76[1][4]。
2.BNP/NT-proBNP检测的特异性
2.1BNP的检测特异性
目前BNP分析都受到proBNP循环浓度和截断BNP代谢物的影响，导至生物活性BNP 1-32浓度估计过高[2][5]。商业BNP检测试剂是基于两种单克隆抗体或单克隆抗体和多克隆抗体组合的三明治型免疫测定。通常一种抗体与二硫键形成的环结构结合，另一种抗体与BNP的C端或N端结合。二硫键介导的环结构和C端结构在血液样本中似乎是稳定的，但目前也没有数据表明BNP抗体不识别proBNP。此外，BNP（1-32氨基酸）释放进入循环后，在NH2端降解为BNP 3-32，这种降解可能会影响结合肽N端表位的抗体亲和力[3]。
2.2NT-proBNP的检测特异性
通常NT-proBNP商业免疫检测试剂使用非糖基化校准材料，且大多数抗体是针对具有潜在O-糖基化位点占用的表位。而大部分与NT-proBNP和proBNP相关的循环无活性肽是O糖基化修饰的，因此这些商业化试剂不能测量NT-proBNP相关的糖基化肽。此外，NT-proBNP检测结果还会受到完整proBNP（尤其是非糖基化）和其他短肽干扰[2]。